CTGリピート増幅を欠く筋強直性ジストロフィーにおける下流遺伝子発現異常の証明

缺乏 CTG 重复扩增的强直性肌营养不良下游基因表达异常的证明

• 批准号: 10770358
• 负责人: 津留 智彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770358/
• 关键词: 筋強直性ジストロフィー; 筋緊張性ジストロフィー; MtPK遺伝子; MDPK遺伝子; DMAHP遺伝子; 発現異常; 分子遺伝学

筋強直性ジストロフィーの病態解明に関する以下の研究を行った。1.CTGリピート伸長のない筋強直性ジストロフィー患者におけるMtPK遺伝子の異常解析。CTGリピート伸長のない筋強直性ジストロフィー患者のリンパ球を分離し、細胞株を樹立した。分離した患者リンパ球からgenomicDNAを抽出。PCR法によりMtPK遺伝子のエクソンの全配列を増幅。鋳型として抽出したgenomicDNAを用い、酵素はTaKaRa Taq、primerはGenome Date BaseのMtPK遺伝子塩基配列から、12エクソンそれぞれを増幅するように決定して合成。シークエンス反応はTher mo Sequenase fluor escent labelled primer cycle sequencing kit with 7-deaza-dGTPを用いた。・・CTGリピート伸長のない筋強直性ジストロフィー患者のMtPK遺伝子のエクソン内に欠失、点変異の存在は検出されなかった。2.筋強直性ジストロフィー患者におけるDMAHPの発現解析。患者・非患者のリンパ球から抽出したRNAを用い、ノザン解析・RT-PCRを施行した。・・RT-PCRでは発現の差はなかったが、ノザン解析で患者での発現低下が示唆された。3.CTGリピート伸長のない患者におけるDMAHPの発現解析。患者・非患者のリンパ球から抽出したRNAを用い、DMAHP遺伝子プローブを用いてノザン解析施行した。・・CTGリピート伸長のない患者と非患者のリンパ球で発現の差を認めなかった。以上から、CTGリピート伸長のない筋強直性ジストロフィー患者において、DMAHP遺伝子の発現異常の可能性が示された。今後は、エクソン以外の領域の解析と、筋組織における発現の解析を予定している。

进行了以下研究，以阐明肌肉营养不良的病理。 1。CTG在肌肉营养不良患者中不重复MTPK基因的扩展。分离了没有CTG重复生长的肌肉直接营养不良的淋巴细胞，并建立了细胞。从分离的患者淋巴细胞中提取基因组。 PCR方法扩大了MTPK基因的整个外显子。使用提取为模具的基因组基因组，确定该酶从酶的基因组日期碱基的MTPK基因中扩增12个exonson，而引物是MTPK基因。序列反应与7-DEAZA-DGTP的其他mo序列酶荧光eScent标记的引物周期测序试剂盒一起使用。 CTG重复不强化肌肉强烈准备的Dystrofie患者MTPK基因被删除，没有检测点。 2。肌肉营养不良患者的DMAHP表达分析。使用从患者和患者淋巴细胞中提取的RNA实施NOZAN分析和RT-PCR。 RT-PCR的表达没有差异，但是NOZAN分析表明患者表达降低。 3。CTG在没有扩展的患者中重复对DMAHP的有意分析。使用DMAHP基因探针使用从患者或患者淋巴细胞中提取的RNA进行NOZAN分析。 CTG重复不认识患者和非患者之间的表达差异。从上面，在没有CTG重复生长的情况下，DMAHP基因异常表达的可能性。将来，我们计划分析外显子以外的其他区域，并分析肌肉组织中的表情。