シグナル伝達アダプター分子CRKによるJunキナーゼ活性化のメカニズムの解析

信号转导接头分子CRK激活Jun激酶的机制分析

基本信息

批准号：
10770093
负责人：
田中伸哉
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770093/
关键词：
crk C3G Jun kinase signal transduction CRK シグナル伝達アダプター Junキナーゼ

项目摘要

研究代表者は本研究助成において、申請時の目的を達成した。すなわちR-RasがC3Gの基質として機能し、Junキナーゼ(JNK)を活性化しv-Crkの癌化に関与することを見出し報告した(Mochizuki,N.,et al.,J.Biol.Chem.,2000,in press)。研究代表者はこれまでニワトリ肉腫のウイルスのコードする癌遺伝子v-Crkの癌化のメカニズムの解明を目的に研究を行ってきており、本研究においてはR-Rasがv-Crk/C3G複合体からのシグナルを媒介し癌化に関与することを明らかにした。V-CrkはSH2/SH3領域からなるアダプター分子でありそれ自身は何ら酵素活性を持っていないにもかかわらずチロシンキナーゼ活性を上昇させて細胞癌化を誘導するが、そのメカニズムは不明であった。我々は独自にv-Crk結合分子C3Gを単離し、その解析を進めていたが1997年までの段階でv-CrkはC3Gを介してJNKを活性化し細胞癌化に関与することを報告していた。しかしながらC3GのJNK活性化に関与する基質は不明であった。本研究では一連のsmall G蛋白を調べることによって、R-RasがC3Gの基質として機能しJNKを活性化することが明らかとなった。具体的には、活性化型R-Ras-V38は一過性発現によって293T細胞において、JNKを活性化し、野生型R-Ras-WTのJNK活性化能は、Crk、C3Gの共発現によって上昇した。また、Dominant negative from R-Ras-N43は、CrkおよびC3GのJNK活性化能を抑制した。さらに、R-Ras-N43はv-Crkでtrans fromしたNIH3T3の癌化能を形態的にrevertした。これらの結果からR-RasはC3Gの基質としてJNK活性化に関与すると結論づけられた。今後はR-RasのJNK活性化に必要な標的分子の解明を試みる。

首席研究人员在本研究赠款中应用时实现了目的。换句话说，我们发现R-RAS充当C3G的底物，激活Jun激酶（JNK），并参与V-CRK的癌化（Mochizuki，N。，等，J。Biol。Chem。，2000年，印刷中）。研究人员一直在进行研究，目的是阐明由鸡肉肉瘤病毒编码的癌基因V-CRK的机制，在这项研究中，它显示R-RAS通过从V-CRK/C3G复合物中介导信号来参与癌症转化。 V-CRK是由SH2/SH3区组成的衔接子分子，尽管它本身没有任何酶活性，但它会增加酪氨酸激酶活性并诱导细胞致癌，但其机制尚不清楚。我们独立地分离了V-CRK结合分子C3G并进行了分析，但是到1997年，V-CRK报告了它通过C3G激活JNK并参与细胞致癌。但是，涉及C3G JNK激活的底物尚不清楚。在这项研究中，通过检查一系列小的G蛋白，发现R-RAS是C3G的底物并激活JNK。具体而言，激活的R-RAS-V38通过瞬态表达激活了293T细胞中的JNK，并且通过CRK和C3G的共表达来增加野生型R-Ras-WT激活JNK的能力。来自R-RAS-N43的主要负面也抑制了CRK和C3G激活JNK的能力。此外，R-RAS-N43在形态学上恢复了从V-CRK的NIH3T3 Trans的癌症形成潜力。这些结果得出的结论是，R-RAS参与JNK激活作为C3G的底物。将来，我们将尝试阐明R-RAS激活JNK所需的目标分子。