クロマチンリモデリングと細胞の癌化・老化の制御機構の解析

染色质重塑与细胞癌变和衰老的控制机制分析

基本信息

批准号：
14026004
负责人：
田中伸哉
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026004/
关键词：
クロマチンリモデリング滑膜肉腫シグナル伝達 SYT-SSX hBRM 癌化

项目摘要

本研究は滑膜肉腫関連癌遺伝子SYT-SSXがクロマチンリモデリング因子hBRMと結合することから、SYT-SSX遺伝子を用いて細胞の癌化・老化能の解析を行うものであり、今年度は以下の成果を得た。(1)特許出願。これまでの研究成果に基づき、SYT-SSXとhBRMの結合を阻害する50アミノ酸領域の同定が、滑膜肉腫の遺伝子治療の基盤技術となることを示し、国内特許を出願した(発明者:田中伸哉、長嶋和郎名称:ヒト滑膜肉腫に対する遺伝子治療法、特願2002-050894)。(2)SYT-SSX1によるp21発現誘導。細胞老化と関連してSYT-SSX1及び各種変異体をラット線維芽細胞及びhBRM欠損SW13細胞株に導入すると、p21の発現量が増加することを見出した。SYT-SSX1とhBRMの共発現によりp21の発現量は更に亢進した。変異体解析によりこのp21の誘導には、SYT-SSX1のQPGY domain及びC末側が必要であることが明らかとなった。(3)SYT-SSX1によるp53非依存性p21プロモーターの活性化。293T細胞においてSYT-SSX1の過剰発現によりp21プロモーターを活性化することをルシフェラーゼアッセイにより確認した。(p21プロモータープラスミドは国立長寿研磯部先生より分与)。さらにp53欠損HCT116細胞株(Bert Vogelstein教授より分与)を用いてp21の誘導におけるp53依存性を確認したところ、SYT-SSX1によるp21誘導はp53非依存性であることが判明した。SYT-SSXは単に増殖を亢進されるのみではなく、増殖に負の信号も伝達する分子であり、細胞により老化と癌化のバランスのメカニズムの検討を行っている。(4)SYT-SSX1トランスジェニックマウスの作成。LTR由来のプロモーターで発現が制御されるベクターを導入したマウスは出産数が低いものの作成された。現在ヘテロの状態で6ケ月観察しているが明らかな異常所見は得られていない。また、テトラサイクリンにてSYT-SSXが発現誘導可能なマウスの作成のためTRE-SYT-SSX1マウスを作成したところ出産数もコントロールと同等のマウスを得られた、現在rtTA発現マウスとの交配を行っている。

这项研究分析了使用SYT-SSX基因的细胞的癌症和衰老能力，为滑膜肉瘤相关的癌基因SYT-SSX，该基因与染色质重塑因子HBRM结合，今年我们获得了以下结果：（1）专利应用。基于先前的研究结果，已提议确定一个50个氨基酸区域，该区域抑制Syt-SSX和HBRM的结合是滑膜肉瘤基因治疗的基本技术，并已提交了国内专利（发明人：Tanaka Nobuya，Tanaka Nobuya，Nagashima Kazuo名称：Nagashima Kazuo名称：Gene kazuo name：Gene kazuy name：Gene sarapy sarcom for Humans Consantial 2002-2002-2002-2002-portent patten patent patent patent patent patent patent patent patent patent patency ptatent 2002。（2）SYT-SSX1诱导P21表达。与细胞衰老相关，发现将SYT-SSX1和各种突变体引入大鼠成纤维细胞和HBRM缺陷型SW13细胞系增加了p21的表达水平。 SYT-SSX1和HBRM的共表达进一步增加了p21的表达水平。突变分析表明，SYT-SSX1的QPGY结构域和C末端是诱导P21所必需的。（3）通过SYT-SSX1激活p53独立的p21启动子。荧光素酶测定法证实，SYT-SSX1的过表达激活293T细胞中的P21启动子。（P21启动子质粒由Choju国家研究所Isobe教授分发。）此外，使用p53缺乏的HCT116细胞系（由Bert Vogelstein教授分配）证实了p53依赖性p21的诱导p21，并发现P21诱导由Syt-SSX1诱导。 SYT-SSX是一种分子，不仅可以促进增殖，而且还会传递负信号到增殖，我们正在研究细胞衰老和癌症发展之间平衡的机制。（4）创建SYT-SSX1转基因小鼠。尽管出生数量较少，但仍产生了与载体控制的矢量的小鼠，其表达受到LTR的启动子的控制。目前，我们一直在观察六个月的异源状况，但尚未获得明显的异常发现。此外，为了创建可以使用四环素诱导SYT-SSX表达的小鼠，制备了TRE-SYT-SSX1小鼠，并且获得了与对照相同的出生数量的小鼠，目前与RTTA表达小鼠配对。