Elucidation of survival strategy of virus by targeting for 14-3-3epsilon

以14-3-3ε为靶点阐明病毒的生存策略

基本信息

批准号：
22K15476
负责人：
坂直樹
金额：
$ 3万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ヒトパラインフルエンザウイルス2型(hPIV2)のV蛋白は、これまでに多くの宿主蛋白との結合が報告されており、中でも免疫システムに関与している宿主蛋白と結合することで免疫応答を抑制していることがわかっている。本研究は14-3-3εに着目し、hPIV2のV蛋白と14-3-3εとの結合が宿主の免疫システムやアポトーシスに関与していると考え、研究を進めた。hPIV2のV蛋白と14-3-3εの部分欠損変異体との共免疫沈降(IP)によって、14-3-3εのV蛋白との結合部位はN末端部分であると同定した。さらに、14-3-3εはV蛋白の機能欠損変異体(Vmut)とは結合しないことが分かった。また、14-3-3εのノックダウン細胞株を作製し、それによる解析により、14-3-3εの欠損はhPIV2の増殖を負に制御することが分かった。リバースジェネティクス法により作製したhPIV2の野生型ウイルス(rPIV2/wt)とVmutを持つウイルス(rPIV2/Vmut)を感染させてcaspaseの活性を測定すると、rPIV2/wtはrPIV2/Vmutよりcaspaseの活性化を抑制し、アポトーシスを抑制していることが分かった。14-3-3εは切断されると、アポトーシスが促進されることが知られている。rPIV2/wtの感染により14-3-3εは切断されたが、rPIV2/Vmutを感染させた方が14-3-3εの切断量は増加していた。この結果より、V蛋白あるいはVmutを発現させた細胞にアポトーシス誘導剤を作用させたところ、V蛋白を発現させた細胞は14-3-3εの切断量が減少していたことから、V蛋白は14-3-3εと結合することによって14-3-3εの切断を抑制しており、結果としてアポトーシスを抑制していると考えられる。

据报道，2 型人类副流感病毒 (hPIV2) 的 V 蛋白可与许多宿主蛋白结合，其中它通过与参与免疫系统的宿主蛋白结合来抑制免疫反应。本研究以14-3-3ε为中心，基于hPIV2 V蛋白与14-3-3ε的结合参与宿主免疫系统和细胞凋亡的思路进行研究。通过 hPIV2 V 蛋白和 14-3-3ε 部分缺失突变体的免疫共沉淀 (IP)，我们确定 14-3-3ε V 蛋白的结合位点是 N 末端部分。此外，还发现14-3-3ε不与V蛋白的功能性缺失突变体(Vmut)结合。此外，我们创建了14-3-3ε敲低细胞系并对其进行了分析，结果表明14-3-3ε缺失对hPIV2的增殖有负向调节作用。当通过感染通过反向遗传学制备的hPIV2野生型病毒(rPIV2/wt)和携带Vmut的病毒(rPIV2/Vmut)来测量caspase活性时，发现rPIV2/wt比rPIV2/Vmut更激活caspase，抑制细胞凋亡。。已知 14-3-3ε 的裂解可促进细胞凋亡。虽然14-3-3ε因rPIV2/wt感染而被裂解，但当感染rPIV2/Vmut时，裂解的14-3-3ε的量增加。根据该结果，认为当用凋亡诱导剂处理表达V蛋白或Vmut的细胞时，在表达V蛋白的细胞中14-3-3ε的裂解量减少。，它抑制 14-3-3ε 的裂解，从而抑制细胞凋亡。