生体内分子をターゲットとした革新的バイオイメージング法による診断・治療法の開発

使用针对生物分子的创新生物成像方法开发诊断和治疗方法

• 批准号: 24659579
• 负责人: 藤堂 省
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24659579/
• 关键词: 光イメージング; 抗原抗体反応; 細胞内送達; 腫瘍診断

今回、光プローブを搭載した抗体をもちいて細胞内・細胞外分子を生体イメージングすることを目的として、①抗原分子に特異的なシグナルを担保するための技術開発（抗原結合時にのみ活性化される光プローブの開発）、②細胞内あるいは生体内組織への光プローブ送達に関して研究した。①抗原結合時にのみ活性化される光プローブの開発腫瘍マーカー分子であるDlk-1を発光検出できるタンパク質プローブの開発を目指した。この手法を確立するため、大腸菌内でのFlucN-SNAPおよびFlucC-SNAPの発現、可溶化、精製を経て、FlucN-SNAPおよびFlucC-SNAPタンパク質を得た。得られたFlucN-SNAPおよびFlucC-SNAPはBG修飾Alexa Fluor 488と正しく結合した。すなわち、SNAPタグ部分の機能が維持されていることが確認できた。現在、本プローブの発光検出能評価として、培養細胞表面に発現させたGFPの発光検出実験を進めている。②細胞内への光プローブ送達のための研究我々は、R8-LP（膜透過性ペプチドオクタアルギニンを搭載したR8搭載リポソーム）はマクロピノサイトーシスを介して細胞内に取り込まれ、効率的な細胞質分子送達が可能である。今回、抗体パッケージングの検討を行い、脂質膜組成/抗体量/R8修飾量を最適化し200nm程度の正電荷ナノ粒子の調製に成功した。その後、蛍光標識抗体を搭載したキャリアを調製し、その細胞内取り込みをフローサイトメトリーにより評価し、本送達システムが効率的な抗体導入を実現することを確認した。その結果、抗体が核膜を特異的に認識している様子が観察され、本システムが生体内分子をターゲットとする技術として有用である可能性が示された。

这次，为了使用配备了光学探针的抗体，其目的是生活在 - 细胞和 - 细胞分子中，（1）技术开发以确保抗原分子中的特定信号（仅在抗原结合期间被激活） 。 （1）仅在抗原键合过程中激活的光探针发育的发展旨在开发一种蛋白探针，该探针可以检测DLK-1的光发射，即分子。为了建立这种方法，在大肠杆菌中表达，溶解和抗鞭毛-SNAP和FLUCC-SNAP纯化后，获得了FLUCN-SNAP和FLUCC-SNAP蛋白。将获得的Flucn-SNAP和FLUCC-SNAP与BG修饰Alexa Fluor 488正确结合。也就是说，已经确认了快照标签部分的功能。目前，作为对该探针的光发射检测的评估，GFP的光发射检测实验正在进行培养的细胞表面。 （2）细胞中光探针的研究是R8-LP（配备有膜通透性肽藻氨酸的R8安装的脂质体）通过大分子递送进口到细胞中。这次，检查了抗体包装，并优化了脂质膜组成/抗体体积/R8修饰，并成功制备了约200 nm的常规货物纳米颗粒。后来，已经确认制备了配备有荧光标记抗体的载体，并通过流场计量机进行了细胞内进口，并且预订系统将获得有效的抗体。结果，观察到抗体特异性地识别核膜，表明该系统可作为靶向生物分子的技术有用。

项目成果

「虚血/再灌流傷害における高血糖および脂肪化病態肝の反応性の相違」

“缺血/再灌注损伤中高血糖和脂肪肝反应性的差异”

• 发表时间: 2012
• 作者: 2.芳賀 早苗;小澤 岳昌;森田 直樹;阿部 理一郎;藤堂 省;尾崎 倫孝
• 通讯作者: 尾崎 倫孝

Dehydroxymethylepoxyquinomicin (DHMEQ), a novel NF-kappaB inhibitor, inhibits allergic inflammation and airway remodeling in murine models of asthma.

脱羟甲基环氧喹诺星 (DHMEQ) 是一种新型 NF-kappaB 抑制剂，可抑制小鼠哮喘模型中的过敏性炎症和气道重塑。

• 发表时间: 2012
• 期刊: Clinical Experimental Allergy
• 作者: Kenichi Shimizu;Satoshi Konno;Michitaka Ozaki;Kazuo Umezawa;Kenichiro Yamashita;Satoru Todo;Masaharu Nishimura.
• 通讯作者: Masaharu Nishimura.

In vivo monitoring of liver damage by caspase-3 probe.

Caspase-3探针体内肝损伤监测。

• 发表时间: 2012
• 期刊: Theranostics
• 影响因子: 12.4
• 作者: Michitaka Ozaki;Sanae Haga;Takeaki Ozawa.
• 通讯作者: Takeaki Ozawa.

α-fetoprotein, vascular endothelial growth factor receptor-1and early recurrence of hepatoma.

甲胎蛋白、血管内皮生长因子受体1与肝癌早期复发。

• 发表时间: 2012
• 期刊: World J Gastroenterol
• 作者: Toshiya Kamiyama;Masato Takahashi;Kazuaki Nakanishi;Hideki Yokoo;Hirofumi Kamachi;Nozomi Kobayashi;Michitaka Ozaki;Satoru Todo
• 通讯作者: Satoru Todo