デザインされた誘発Dicによる微小核/クロモトリプシス形成過程の解析

设计诱导Dic分析微核/染色体碎裂形成过程

基本信息

批准号：
18K11647
负责人：
津山尚宏
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

電離放射線がゲノムDNAに引き起こすDNA二本鎖切断(DSB)の一部は、異なった切断端が再結合した場合に染色体転座や二動原体染色体などの染色体異常となる。一つの染色体に２つのセントロメアを持つ二動原体染色体および同時に生じる染色体断片は、細胞分裂終了後に細胞核に取り込まれることなく微小核(MN)形成を形成することが多く、微小核は細胞質の自然免疫応答機構を介して炎症応答を惹起し、次の細胞周期で核内に取り込まれ修復されることにより複雑に融合した異常染色体（クロモトリプシス）の原因となる。この経路を効率よく解析するために誘導実験系の確立を試みている。前年度までに作成したiCre-loxPあるいはERT2-Creでは、Dicの誘導効率が10^-7程度と低く解析に十分な細胞数を得ることができなかった。他方で一過性導入系のCRISPR-Cas9を用いた染色体異常誘導系として、多発性骨髄腫で観察される11番染色体CCND1遺伝子および14番染色体IgH遺伝子間のt(11;14), 線維形成性小細胞腫瘍の11番染色体WT1遺伝子と22番染色体EWSR1遺伝子間のt(11;22), 非小細胞肺がんの5番染色体CD74遺伝子と6番染色体ROS1遺伝子間のt(5;6)誘導時に、それぞれの特異的転座と同時に同じ組み合わせの二動原体染色体が生じていることをゲノムDNAを用いたPCRにより確認できた。Dicの消長の過程の細胞応答を効率よく調べるため、今後、Dicの生成を蛍光タンパク質の発現でモニターしDicが生じた細胞を単離できる実験系を開発し、遺伝子発現の変化の網羅的解析を試みる。

基因组 DNA 中电离辐射引起的一些 DNA 双链断裂 (DSB) 会导致染色体异常，例如当不同切口重组时染色体易位和双着丝粒染色体。一条染色体上有两个着丝粒的双着丝粒染色体和同时出现的染色体片段常常在细胞分裂后形成微核（MN），而微核自然存在于细胞质中，它通过微核诱导炎症反应。免疫反应机制，并被摄入细胞核并在下一个细胞周期进行修复，引起异常染色体的复杂融合（染色体碎裂）。我们正在尝试建立一个引导实验系统来有效地分析该途径。截至前一年制作的iCre-loxP或ERT2-Cre，Dic诱导效率低至10^-7左右，无法获得足够数量的细胞用于分析。另一方面，作为使用瞬时导入系统CRISPR-Cas9的染色体畸变诱导系统，在多发性骨髓瘤中观察到的11号染色体上的CCND1基因和14号染色体上的IgH基因之间的t(11;14)诱导纤维化小细胞肿瘤中 11 号染色体 WT1 基因和 22 号染色体 EWSR1 基因之间的 t(11;22)，基因组分析表明，当非小细胞肺癌中5号染色体上的CD74基因和6号染色体上的ROS1基因之间诱导t(5;6)时，每个特定易位同时发生相同的双着丝粒染色体组合这通过使用 DNA 的 PCR 得到证实。为了有效地研究Dic生长和衰退过程中的细胞反应，我们将开发一个实验系统，可以通过荧光蛋白的表达监测Dic的产生并分离发生Dic的细胞，并全面分析基因表达的变化。

项目成果

期刊论文数量（23）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Optimization of chromosome specimen preparation for biodosimetry using chromosome aberration frequency.

使用染色体畸变频率优化用于生物剂量测定的染色体样本制备。

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Naohiro Tsuyama; Yu Abe; Misaki Sugai
通讯作者：
Misaki Sugai

Induction of sequence-specific chromosomal aberration using CRISPR/Cas9 and Cre-loxP.

使用 CRISPR/Cas9 和 Cre-loxP 诱导序列特异性染色体畸变。

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
Naohiro Tsuyama; Yu Abe; Misaki Sugai; Yusuke Azami; Ken
通讯作者：
Ken

CRISPR/Cas9を用いた染色体転座t(11;14) 誘導系の作製と染色体異常解析への応用

利用CRISPR/Cas9构建染色体易位t(11;14)诱导系统并应用于染色体异常分析

DOI：
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
0
作者：
津山尚宏;阿部悠;柳亜紀;菅井美咲;神谷研二;坂井晃
通讯作者：
坂井晃

Induction of sequence-specific chromosomal aberration using CRISPR/Cas9 and Cre-loxP.

使用 CRISPR/Cas9 和 Cre-loxP 诱导序列特异性染色体畸变。

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
Naohiro Tsuyama; Yu Abe; Misaki Sugai; Yusuke Azami; Ken
通讯作者：
Ken

Investigation of the cumulative number of chromosome aberrations induced by three consecutive CT scans.

研究连续三次 CT 扫描诱发的染色体畸变的累积数量。

DOI：
发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yu Abe; Hideyoshi Noji; Misaki Sugai; Yumiko Kurosu; Takashi Ohba; Naohiro Tsuyama; Aki Yanagi; Yukari Yanai; Tetsuo Ishikawa; Tomisato Miura; Kenji Kamiya; Mitsuaki A Yoshida; Akira Sakai
通讯作者：
Akira Sakai