Vaccine development of mosquito-borne infectious diseases using molecular controllable multiple antigen-displaying virus-like particles

利用分子可控多重抗原展示病毒样颗粒开发蚊媒传染病疫苗

基本信息

批准号：
20H00411
负责人：
朴龍洙
金额：
$ 28.7万
依托单位：
Shizuoka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)SC/ST化学修飾による多価VLPの作製：ノロウイルス様粒子（NoV-LP）にSpyTag (ST)を融合したNoV-LP、SpyCatcher (SC)にEGFPを融合したSC-EGFP及びm-Cherryを融合したSC-Cherryを共発現したところ、EGFPとm-Cherryを提示したNoV-LPの形成を確認した。Merozoite surface proteinとCircumsporozoite protein抗原CSPΔTM、MSPΔTM及びpfMSP1-19をカイコで発現し得られたタンパク質をそれぞれ1.5 mg, 2.5 mg, 1.8 mg及び1.8 mgを得、動物試験に供した。(2）ナノ粒子の機能化：Flagタグを連結した4価DENV-LPをカイコで発現し、Flagタグを修飾した磁気ナノ粒子（MNP）で精製したところ、DENV-LP/CprMEは、カイコ１頭当たり43 μg、prMEの場合10 μgの精製タンパク質（回収率69ー79％）を回収した。(3) 動物実験：カイコで発現・精製したDENV-LP/1-4CprME及びDENV-LP/1-4prMEを、２週間間隔で2回マウスに免疫を行った。DENV-LP/CPrMEがDENV-LP/prMEよりも強い免疫応答を示し、最も高い活中和活性を示した。マラリアの抗原CSPΔTM、MSPΔTM及びpfMSP1-19を2週間間隔2回マウスに免疫を行い、免疫63日後Plasmodiuim yoelli XL原虫を攻撃し、血清の赤血球内寄生生殖変化（parasitemia）を調べたところ、抗体は産生したものの、パラシテミアの値は対照実験と大きな差はなかった。この結果は、P. yoelliは本抗原の評価系としては不適切であると判断し、今後P. yoelli評価系に適した抗原を用いる予定である。

（1）通过SC/ST化学修饰制备多价VLP：NoV-LP，是与SpyTag（ST）融合的诺如病毒样颗粒（NoV-LP），SC-EGFP，是与SpyCatcher（SC）融合的SpyCatcher（SC） EGFP和m-当SC-Cherry与Cherry融合时，确认了展示EGFP和m-Cherry的NoV-LP的形成。在家蚕中表达裂殖子表面蛋白和环子孢子蛋白抗原CSPΔTM、MSPΔTM和pfMSP1-19，分别获得所得蛋白1.5mg、2.5mg、1.8mg和1.8mg，并进行动物试验。 (2)纳米颗粒的功能化：当连接到Flag标签的四价DENV-LP在蚕中表达并使用带有Flag标签修饰的磁性纳米颗粒(MNP)纯化时，我们在蚕中发现了DENV-LP/CprME，我们回收了43μg纯化的DENV-LP/CprME。每头蛋白质，或 prME 10 μg（回收率 69-79%）。 (3)动物实验：用DENV-LP/1-4CprME和在家蚕中表达纯化的DENV-LP/1-4prME，每隔两周免疫小鼠两次。 DENV-LP/CPrME 表现出比 DENV-LP/prME 更强的免疫反应，并且表现出最高的中和活性。每隔两周用疟疾抗原 CSPΔTM、MSPΔTM 和 pfMSP1-19 对小鼠进行两次免疫，免疫后 63 天，用约氏疟原虫 XL 寄生虫攻击小鼠，并检查血清中红细胞中的寄生虫血症。寄生虫血症值与对照实验没有显着差异。基于该结果，我们确定约氏疟原虫不适合作为该抗原的评估系统，并且我们计划将来使用适合约氏疟原虫评估系统的抗原。

项目成果

期刊论文数量（19）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification of antigenic domains and peptides from VP15 of white spot syndrome virus and their antiviral effects in Marsupenaeus japonicus

白斑综合症病毒VP15抗原结构域和肽的鉴定及其对日本对虾的抗病毒作用

DOI：
10.1038/s41598-021-92002-8
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
4.6
作者：
Boonyakida Jirayu;Xu Jian;Satoh Jun;Nakanishi Takafumi;Mekata Tohru;Kato Tatsuya;Park Enoch Y.
通讯作者：
Park Enoch Y.

Dengue Virus-like Particles Assembly from Structural Proteins Expressed in Silkworm and Characterization

家蚕表达的结构蛋白组装登革热病毒样颗粒及其表征

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
Doddy Irawan Setyo Utomo;Enoch Y. Park
通讯作者：
Enoch Y. Park

静岡大学生物工学研究室

静冈大学生物工程实验室

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Identification of secretion domain of Neospora caninum profilin

犬新孢子虫profilin分泌结构域的鉴定

DOI：
10.1016/j.bbrc.2019.11.056
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
3.1
作者：
Suhaimi Hamizah;Xu Jian;Kato Tatsuya;Setyo Utumo Doddy Irawan;Sekiguchi Tomofumi;Park Enoch Y.
通讯作者：
Park Enoch Y.

The eliciting capability a humoral immune response in a mouse model induced with dengue virus-like particles serotypes 1 and 4 produced in silkworm larvae

家蚕幼虫产生的血清型 1 和 4 型登革热病毒颗粒诱导的小鼠模型中引发体液免疫反应的能力