コンパートメント特異的なシナプスプロテオミクス解析法の確立

区室特异性突触蛋白质组学分析方法的建立

基本信息

批准号：
20H03340
负责人：
平野恭敬
金额：
$ 11.81万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03340/
关键词：
シナプスショウジョウバエプロテオミクス

项目摘要

過去の研究の蓄積により、複雑な脳神経ネットワークの構造が紐解かれ、個々の神経の特異的役割が明らかになってきた。次世代の中心的問いの一つとなるは、特異的な役割を果たすために、さらにミクロの単位である個々のシナプスはどのようにシグナル分子を使い分けているか、である。脳神経回路では、層構造に代表されるように局在化した投射領域（ここではコンパートメントと呼ぶ）が見られ、コンパートメント間にはシナプスの生化学的差異があることが予想される。しかしながらその解析法がないために、シナプス間のシグナル分子の使い分けについてほとんど知られていない。本研究では、ショウジョウバエのキノコ体神経をモデルとして、コンパートメント特異的なシナプスの生化学的特性を解析する手法を開発し、シナプス間におけるシグナル分子の使い分けを明らかにする。本年度はキノコ体の特定コンパートメントに存在する前シナプス、後シナプスを単離するために必要なショウジョウバエ系統を複数確立し、各特性を免疫組織染色、免疫沈降法により条件検討を行った。シナプス間を標識するＧＲＡＳＰ法を改変し、２０以上のショウジョウバエ系統作成し、その中からＧＲＡＳＰ効率がよく、免疫沈降の効率が良く、かつ非特異的な沈降の少ないものを選択した。さらにシナプス分画からの免疫沈降を行うための手法の最適化を行った。現在までに、コンパートメント特異的シナプスを単離するためのショウジョウバエ系統の選択を完了し、免疫沈降の最適化を終了した。

通过以往研究的积累，复杂的脑神经网络的结构已经被解开，个体神经的具体作用也变得清晰。下一代的核心问题之一是个体突触（微观单位）如何使用不同的信号分子来履行特定的作用。在大脑神经回路中，观察到以分层结构为代表的局部投影区域（此处称为区室），并且预计区室之间的突触存在生化差异。然而，由于没有这方面的分析方法，因此人们对突触之间信号分子的正确使用知之甚少。在本研究中，我们将使用果蝇蘑菇体神经元作为模型，开发一种方法来分析区室特异性突触的生化特性，并阐明突触之间信号分子的正确使用。今年，我们建立了分离蘑菇体特定区室中存在的突触前和突触后所需的多种果蝇菌株，并使用免疫组织化学染色和免疫沉淀检查了每种特征的条件。我们修改了突触间标记的GRASP方法，创建了20多个果蝇菌株，并选择了GRASP效率高、免疫沉淀效率高、非特异性沉淀少的果蝇菌株。此外，我们还优化了突触组分的免疫沉淀方法。迄今为止，我们已经完成了果蝇菌株的筛选和区室特异性突触的分离，并完成了免疫沉淀的优化。

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Rpd3/CoRest-mediated activity-dependent transcription regulates the flexibility in memory updating in Drosophila.

DOI：
10.1038/s41467-021-20898-x
发表时间：
2021-01-27
期刊：
Nature communications
影响因子：
16.6
作者：
Takakura M;Nakagawa R;Ota T;Kimura Y;Ng MY;Alia AG;Okuno H;Hirano Y
通讯作者：
Hirano Y

Controlling the flexibility in memory updating through the gating mechanism for activity-dependent transcription in Drosophila

通过果蝇活性依赖性转录的门控机制控制记忆更新的灵活性

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
Xu Zhihong;MacIntosh Andrew J.J.;Castellano-Navarro Alba;Macan?s-Mart?nez Emilio;Suzumura Takafumi;Duboscq Julie;三國貴康;Yukinori Hirano
通讯作者：
Yukinori Hirano