筋ジストロフィーにおける血管作動性因子のスプライシング動態の解明と治療応用

阐明肌营养不良症中血管活性因子的剪接动力学及其治疗应用

基本信息

批准号：
20K08243
负责人：
竹島泰弘
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは、Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)に対し、ジストロフィン遺伝子のスプライシングを制御するエクソンスキッピング誘導治療の有効性を明らかにした。現在、世界各地で治験が実施され、その一部はすでに治療薬として承認されている。しかし、特定の遺伝子変異を対象とした治療であるため、より多くのDMD症例を対象とした新たな治療戦略が切望されている。近年、血管内皮増殖因子(VEGF)、VEGF受容体、一酸化窒素合成酵素などの血管作動性因子がDMDの病態に大きく関与していることが注目されている。さらに、これらの因子には多くのスプライシングアイソフォームが報告されている。申請者は、これらの血管作動性因子の選択的スプライシングが病態に関与し、さらに、そのスプライシングを制御することにより病態を改善し得る可能性を着想した。本研究では血管作動性因子スプライシングアイソフォームの病態への関与を解明する。さらに、アンチセンスオリゴヌクレオチド（AS-oligo）によりこれらのスプライシングを制御する治療法の検討を行う。2022年度は、前年度に引き続き、DMD症例におけるmRNAのサンプリングを行った。また、VEGFスプライシングアイソフォーム解析系の構築を継続している。VEGF-Aにはスプライシング型により、VEGF-A 121, 165, 189などのアイソフォームが存在している。reverse transcription (RT)-PCR法により、これらのアイソフォーム解析系を構築するとともに、エクソン8のスプライスアクセプターサイトの異なる2つのアイソフォーム、165aと165bなどのアイソフォームを同定し得る系の構築の検討を進めている。

申请人已经阐明了外源性衍生物治疗的有效性，该治疗控制了Dystrofin基因的弹药，以刺激杜钦（Duchenne） - 型肌肉营养不良（DMD）。目前，在世界各地进行了临床试验，其中一些已经被批准为治疗药物。但是，由于这是针对特定基因突变的治疗方法，因此确定了更多DMD病例的新治疗策略。近年来，已经注意到，血管活性因子（例如血管内皮生长因子（VEGF），VEGF受体和氮氧化物合成酶）极大地涉及DMD的病理。此外，已经报告了许多剪接同工型。申请人启发了这些血管活性因子在病理状况中涉及的这些血管活性因素的选择性剪接，并可以通过控制冲刺来进一步改善病情。在这项研究中，病理学阐明了血管活性因子的弹力因子的参与。此外，检查了反义寡核苷酸（AS-OLIGO）的治疗方法以控制这些剪接。在2022财年，在上一年之后，在DMD病例中进行mRNA采样。此外，它继续构建VEGF Sprracing同工分析系统。 VEGF-A具有诸如VEGF-A 121、165、189之类的同工型，具体取决于剪接类型。逆转录（RT）-PCR方法构建了这些同工型分析系统，并且在外显子8上扩散了不同的云杉的同工型，该系统的构造可以识别我们正在考虑的同工型。