筋ジストロフィーにおける血管作動性因子のスプライシング動態の解明と治療応用

阐明肌营养不良症中血管活性因子的剪接动力学及其治疗应用

基本信息

批准号：
20K08243
负责人：
竹島泰弘
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは、Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)に対し、ジストロフィン遺伝子のスプライシングを制御するエクソンスキッピング誘導治療の有効性を明らかにした。現在、世界各地で治験が実施され、その一部はすでに治療薬として承認されている。しかし、特定の遺伝子変異を対象とした治療であるため、より多くのDMD症例を対象とした新たな治療戦略が切望されている。近年、血管内皮増殖因子(VEGF)、VEGF受容体、一酸化窒素合成酵素などの血管作動性因子がDMDの病態に大きく関与していることが注目されている。さらに、これらの因子には多くのスプライシングアイソフォームが報告されている。申請者は、これらの血管作動性因子の選択的スプライシングが病態に関与し、さらに、そのスプライシングを制御することにより病態を改善し得る可能性を着想した。本研究では血管作動性因子スプライシングアイソフォームの病態への関与を解明する。さらに、アンチセンスオリゴヌクレオチド（AS-oligo）によりこれらのスプライシングを制御する治療法の検討を行う。2022年度は、前年度に引き続き、DMD症例におけるmRNAのサンプリングを行った。また、VEGFスプライシングアイソフォーム解析系の構築を継続している。VEGF-Aにはスプライシング型により、VEGF-A 121, 165, 189などのアイソフォームが存在している。reverse transcription (RT)-PCR法により、これらのアイソフォーム解析系を構築するとともに、エクソン8のスプライスアクセプターサイトの異なる2つのアイソフォーム、165aと165bなどのアイソフォームを同定し得る系の構築の検討を進めている。

申请人已经确定了外显子跳过诱导疗法在调节肌营养不良蛋白基因剪接Duchenne肌肉营养不良（DMD）方面的疗效。目前，在世界各地正在进行临床试验，其中一些已经被批准为治疗药物。但是，由于它是针对特定基因突变的治疗方法，因此高度需要针对更多DMD病例的新治疗策略。近年来，血管活性因子（例如血管内皮生长因子（VEGF），VEGF受体和一氧化氮合酶）在DMD的病理中显着参与。此外，已经报道了这些因素的许多剪接同工型。申请人认为，这些血管活性因子的替代剪接可能与病理有关，并且控制剪接可以改善病理。这项研究将阐明血管活性因子剪接同工型在病理条件下的参与。此外，将研究用反义寡核苷酸（AS-OLIGO）控制这些剪接的处理。在2022年，与上一年一样，在DMD病例中采样mRNA。此外，我们正在继续构建VEGF剪接同工型分析系统。 VEGF-A由于其剪接类型而具有诸如VEGF-A 121、165、189之类的同工型。我们目前正在使用逆转录（RT）-PCR方法研究这些同工型分析系统的构建，还研究了可以识别具有外显子8的不同剪接受体位点的两个同工型的构建，例如165a和165b。