慢性骨髄性白血病におけるDMR達成率向上の治療戦略の開発

制定提高慢性粒细胞白血病 DMR 达成率的治疗策略

• 批准号: 21K08362
• 负责人: 近藤 健
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08362/
• 关键词: 慢性骨髄性白血病; BCR-ABL1; チロシンキナーゼ阻害剤; エピゲノム関連遺伝子; FRET; 薬剤感受性

慢性骨髄性白血病はチロシンキナーゼ阻害剤の有用性が確立した疾患である。チロシンキナーゼ阻害剤での治療により長期的な効果が期待出来、一部の症例では薬剤を中止しても再発が認められないtreatment free remissionが達成できることが確立している。一方、十分な治療効果が得られない症例も存在し、これらの症例対する治療法の開発が求められている。これまでにエピゲノム関連遺伝子の変異がTKIの治療成績に関連することが報告されており、本研究では臨床的に検出されるエピゲノム関連遺伝子の変異に焦点を当てて解析を進めている。１）ASXL1, DNMT3A遺伝子をテトラサイクリン発現誘導システムのレトロウイルスベクターpRetroX-TetOneに組み込み、野生型、変異型のテトラサイクリン発現誘導ベクターを作成し、TKI感受性CML由来細胞株（K562細胞、KU812細胞）に導入し、テトラサイクリンで発現誘導可能な目的遺伝子を発現する安定形質転換細胞株を樹立した。２）これらの細胞株を用いて、ドキシサイクリン有無でのTKI感受性の解析を行ったところ変異型ASXL1または変異型DNMT3Aの誘導においてTKI感受性の低下が確認された。３）これらの細胞を用いて、導入遺伝子の発現誘導の有無により発現変動が生じる遺伝子群をマイクロアレイを用いて薬剤感受性細胞と薬剤抵抗性細胞の遺伝子プロファイルを解析し、細胞表面分子や細胞内シグナル分子などの発現変動を確認した。マイクロアレイの結果に基づき、薬剤耐性に関与する候補遺伝子を探索したところ、既報における白血病との関連や薬剤感受性に影響する複数の候補遺伝子が同定された。これらの一部ではRQ-PCRにより実際に発現の変動があることが確認できた。４）現在、候補遺伝子についてのTKI感受性の観点から機能解析を実施している。

慢性粒细胞白血病是一种酪氨酸激酶抑制剂的有效性已被证实的疾病。酪氨酸激酶抑制剂的治疗有望产生长期效果，并且已经确定在某些情况下可以实现无治疗缓解，即即使停药后也不会观察到复发。另一方面，也存在无法获得充分的治疗效果的情况，需要开发针对这些情况的治疗方法。此前已有报道，表观基因组相关基因的突变与 TKI 治疗结果相关，在本研究中，我们将分析重点放在临床检测到的表观基因组相关基因的突变上。 1) 将ASXL1和DNMT3A基因整合到四环素表达诱导系统的逆转录病毒载体pRetroX-TetOne中，创建野生型和突变型四环素表达诱导载体，并将其导入TKI敏感的CML来源细胞系（K562细胞、KU812细胞） ）然后我们建立了表达靶基因的稳定转化细胞系，其表达可以用四环素诱导。 2)当在存在或不存在强力霉素的情况下分析这些细胞系的TKI敏感性时，在诱导突变体ASXL1或突变体DNMT3A时证实TKI敏感性降低。 3) 使用这些细胞，我们使用微阵列分析了药物敏感细胞和耐药细胞的基因谱，以识别其表达变化取决于是否存在转基因表达诱导的基因组，并分析了细胞表面分子和细胞内信号我们确认了分子表达的变化等。当我们根据微阵列结果寻找与耐药相关的候选基因时，我们鉴定了多个先前报道与白血病相关并影响药物敏感性的候选基因。在其中一些中，通过 RQ-PCR 证实确实存在表达变化。 4）我们目前正在从TKI敏感性的角度对候选基因进行功能分析。