我国HIV流行毒株包膜蛋白env gp41中和表位的筛选和鉴定

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30901274
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
19.0万
负责人：
张晓丽
依托单位：
佳木斯大学
学科分类：
H2104.逆转录病毒与感染
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
代娣；辛华；李春江；李雅江；张吉生；斗章；李慧玲；
关键词：
跨膜蛋白 gp41 噬菌体展示技术 HIV 表位中和抗体

项目摘要

中和抗体是机体抗病毒免疫的重要组成部分。筛选中和抗体表位是诱导广谱有效的中和抗体的基础与关键。HIV包膜蛋白gp41结构线性且相对保守，糖基化位点低，具有中和抗体识别表位的优势区域。我们的前期研究基础发现，我国感染HIV-1 B'亚型长期不进展者（LTNP）的血清中具有较高的中和抗体活性，gp41中和表位变异率低且具有亚型特异性。本项目拟通过分离LTNP的血清中抗 gp41 IgG抗体，应用噬菌体展示技术进行生物亲和淘筛，获得有效的中和抗体识别表位，选择阳性克隆，DNA测序，进行3DEX、蛋白blast等数据比对，确定线性及构象表位。免疫动物获得抗HIV-1抗体，纯化抗体进行体外实验，最后确认抗体体外中和活性。保守中和表位的筛选与鉴定，将为我国以中和抗体为基础的疫苗设计及免疫治疗提供依据。

结项摘要

摘要诱导有效的中和抗体是机体抗病毒免疫的重要组成部分。以含有高水平HIV-1中和抗体的血浆为配体筛选HIV-1中和抗体模拟性抗原表位是获得广谱有效的中和抗体的关键。HIV包膜蛋白gp41结构线性且相对保守，糖基化位点低，具有中和抗体识别表位的优势区域。入选本研究样本为中国HIV-1流行毒株CRF_B'C 、B'亚型感染长期不进展者（LTNP），经检测血清具有高滴度的、广谱的中和抗体活性，通过分离其血清中 HIV-1 及gp41 IgG抗体，应用噬菌体展示技术进行生物亲和淘筛，获得有效中和抗体识别的表位，选择阳性克隆，DNA测序确定氨基酸，进行3DEX、蛋白blast等数据比对，从而确定线性及构像表位。体外中和抑制实验证明模拟表位中和特异性抗体的能力，免疫动物获得抗HIV-1特异性抗体，纯化抗体进行体外实验，最后确认抗体体外中和活性。.中国HIV/AIDS患者HIV-1外膜蛋白env gp41段中和抗体2F5、4E10保守表位氨基酸均存在突变，B'亚型缓慢进展者、HIV感染者和AIDS患者的4E10表位氨基酸突变具有显著性差异；构建中国流行毒株CRF_B'C 、B'亚型假病毒，完善荧光素酶报告基因中和抗体检测实验平台，建立可以检测中国HIV-1感染者的中和水平体系；用噬菌体随机肽库对CRF_B'C 、B'亚型感染长期不进展者中和抗体识别进行表位分析，获得位于gp120 C2（NNVKT）、V3区（R-GNNNT）、（H-GPGR）及gp41（WGCSGKL-CTT）、（ELDKWA）等识别表位，并绘制中和抗体识别表位位置图谱，所获得表位的噬菌体克隆在体外具有中和抑制作用，说明识别这些表位的抗体在体液免疫中发挥着重要作用；将所获得阳性克隆噬菌体所含表位包括gp120 V3区(GPGRAF)，gp41（GCGKLID），gp41 2F5（ELDKWA），免疫动物获取抗血清，检测出针对免疫原的抗体，且在体外具有中和作用，进一步说明识别表位可以诱导出针对HIV-1特异性抗体，且能够在体液免疫或抗病毒治疗中发挥一定的作用。利用噬菌体随机肽库筛选长期不进展者血浆IgG抗体，能够有效的获得多个HIV-1中和抗体相关抗原摸拟表位。保守中和表位的筛选与鉴定，将为我国以中和抗体为基础的疫苗设计及免疫治疗提供依据。