microRNA参与炎性介质介导的内皮细胞1-磷酸鞘氨醇受体表达的调节
项目介绍
AI项目解读
基本信息
- 批准号:81170297
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:14.0万
- 负责人:
- 依托单位:
- 学科分类:H0218.微循环与休克
- 结题年份:2012
- 批准年份:2011
- 项目状态:已结题
- 起止时间:2012-01-01 至2012-12-31
- 项目参与者:陈波; 李强; 王立群; 曾冲; 吴丽丽;
- 关键词:
项目摘要
1-磷酸鞘氨醇(S1P)有S1PR1、2、3、4和5等5种受体,研究提示S1PR2表达的增加参与了多种炎症相关性疾病的发生和发展。本实验室已证明静息的微血管内皮细胞表达S1PR1和S1PR3蛋白,也表达S1PR2 mRNA;LPS和TNF-alpha刺激可以引起内皮细胞S1PR2的mRNA和蛋白表达增加;S1PR2拮抗剂减轻LPS和TNF-alpha导致的内皮细胞单层通透性升高。本研究拟采用miRNA芯片、实时定量PCR等技术,观察LPS和TNF-alpha刺激内皮细胞后miRNA表达谱的变化,据结果选择内皮细胞特定的miRNA如miR-130a等,通过外源性转染其模拟物或抑制物,证明这些miRNAs活性的改变能够介导S1PR2表达的变化;并证明LPS和TNF-lpha通过影响miR-130a等的转录,解除S1PR2的基因表达抑制,使S1PR2表达水平增加,并介导进一步的炎性反应。
结项摘要
本项目的主要目的是明确 LPS和 TNF-alpha是否可以调节 miR130a等在内皮细胞中的表达,即TNF-alpha或LPS可下调 microRNA如 miR-130的表达,进而解除 microRNA对S1PR2基因转录和蛋白表达的抑制,影响内皮功能。.采用miRNA芯片技术初步筛选和荧光定量PCR验证,观察了TNF-alpha刺激脐静脉内皮细胞后表达下调的miRNA类型。结果提示,miR-130a的表达确有变化,且有时间变化特点,刺激后3-6 hmiR-130a有明显降低,12 h后升高,24 h则再次降低;对应于这个miR-130a的12h和24 h变化的时间特点,S1PR2的mRNA在TNF-α刺激后12 h和24 h的表达都明显增加,但蛋白表达只有在24 h后才增加。通过合成miR-130a的模拟物和抑制物,进一步用miR-130a 模拟物或抑制物转染细胞48 h,观察内皮细胞S1PR2的mRNA和蛋白表达的变化。用miR-130a抑制物载体转染细胞后,S1PR2的mRNA含量明显增加,且S1PR2的蛋白表达也明显增加;结果直接证实了miR-130a对S1PR2的mRNA的抑制作用。.本项目初步研究结果基本证实了原来的假设,即以miR-130a为代表,miRNA参与炎症介质介导的内皮细胞1-磷酸鞘氨醇受体2表达的调节。本课题还对LPS刺激后内皮细胞S1PR2的表达进行了探讨,结果尚在整理中,今后将继续探讨TNF-α刺激内皮细胞早期(3-6 h)后S1PR2的mRNA和蛋白表达变化,并争取进一步申报国家基金面上项目。
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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