2-十三烷酮诱导棉铃虫CYP6B6表达调控机制

将克隆得到的棉铃虫CYP6B2、CYP6B6、CYP6B7和CYP9A17基因启动子序列连接到报告基因载体pGL4.1basic验证启动子的活性，发现这些序列的启动子活性均能够被2-十三烷酮诱导。通过对克隆得到的棉铃虫CYP6B2、CYP6B6、CYP6B7和CYP9A17基因启动子序列的转录因子结合位点的分析，发现棉铃虫CYP6B2、CYP6B6、CYP6B7和CYP9A17基因均具有抗氧化信号通路Nrf2转录因子的结合位点。其中CYP6B6启动子序列不仅具有Nrf2转录因子结合位点还具有芳香烃受体应答信号通路AhR（转录因子的结合位点。.通过Race法克隆得到棉铃虫抗氧化信号通路中的Nrf2、Keap1和AhR转录因子的基因序列，构建重组质粒pACv5His-Red-Nrf2以及pACv5His-EGFP-Keap1分别与连有报告基因的棉铃虫CYP6B2、CYP6B6、CYP6B7和CYP9A17基因启动子共转染，发现均受Nrf2-Keap1信号通路的调控。由于CYP6B6启动子序列不仅具有Nrf2转录因子结合位点还具有AhR转录因子的结合位点，通过构建不同长度CYP6B6启动子的报告基因载体，发现273 bp长度的CYP6B6基因启动子为2-十三烷酮诱导的核心启动子，这一片段同时包含有Nrf2和AhR转录因子结合位点序列，缺失其中任何一个转录因子结合位点的序列并不影响CYP6B6核心启动子的本底活性以及2-十三烷酮的诱导活性，当同时敲出Nrf2和AhR转录因子结合位点序列时，CYP6B6核心启动子不具有启动子活性，同时2-十三烷酮也不能够诱导其启动子活性。通过EMSA实验证实棉铃虫CYP6B6基因的Nrf2和AhR转录因子结合位点的确能与相应的棉铃虫转录因子Nrf2和AhR结合，并且2-十三烷酮处理能使棉铃虫脂肪体细胞核内的Nrf2和AhR表达量升高，能够激发Nrf2和AhR信号通路的响应。激光共聚焦实验进一步证实了2-十三烷酮处理能使棉铃虫脂肪体细胞核内的Nrf2转录因子表达量升高。运用RNAi干扰Nrf2和AhR转录因子的基因表达量时，我们发现棉铃虫CYP6B6基因的表达是受抗氧化信号通路Nrf2以及芳香烃受体应答信号通路AhR的共同调控。.本文从明确了CYP6B6基因的表达受抗氧化信号通路和芳香烃受体应答信号通路的共同调控.