草鱼呼肠孤病毒逃逸宿主细胞RNAi作用通路的分子机制研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31072244
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    35.0万
  • 负责人：
    吕利群
  • 依托单位：
    上海海洋大学
  • 学科分类：
    C1908.水产生物病原学与病害控制
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31

项目摘要

草鱼呼肠孤病毒(GCRV)是草鱼苗种培育阶段的主要病原之一。GCRV双链RNA(dsRNA)基因组逃逸宿主RNA干扰(RNAi)先天抗病毒作用通路的机制尚不清楚。申请者的前期研究发现GCRV的感染不抑制草鱼细胞中的RNAi基因沉默信号通路。本项目将进一步从GCRV基因组与宿主dsRNA受体蛋白Dicer、病毒编码的六种RNA结合蛋白(VP3、NS38、NS80、VP5、VP6和VP7)相互作用的角度探讨其免于被Dicer蛋白切割生成小干扰RNA(siRNA)的具体分子机理：(1)用体外转录和Northern杂交等方法研究宿主Dicer蛋白对人工合成dsRNA的结合与剪切活性在病毒感染前后是否一致；(2)用体外dsRNA结合和体内RNAi抑制等实验分析GCRV编码的dsRNA结合蛋白对病毒基因组是否具有保护性。本项目的研究结果将为利用RNAi技术控制病毒性草鱼出血病提供重要的理论基础。

结项摘要

草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus, GCRV）是引起草鱼出血病的病原，严重危害我国草鱼养殖业的健康发展。外源双链RNA是动物细胞RNA干扰信号通路的模式识别分子，但是GCRV复制过程中其双链RNA（dsRNA）基因组如何避免被宿主的RNA干扰（RNAi）通路清除掉仍不清楚。本项目以GCRV为模型试图解析双链RNA病毒如何避免激活宿主细胞先天抗病毒RNAi信号通路的激活。我们运用RNA转染和Northern blot 技术证实草鱼呼肠孤病毒的双链RNA基因组对草鱼细胞RNAi信号通路敏感，其基因组结构对dsRNA无保护性；运用siRNA和dsRNA介导的基因沉默实验证实草鱼呼肠孤病毒感染能抑制细胞内RNAi信号通路，说明病毒编码的蛋白质是影响RNAi信号通路的主因；构建了一个基于报道基因沉默效应的RNAi抑制蛋白筛选方法，发现病毒编码的双链RNA结合蛋白VP7在高表达的情况下具有RNAi抑制功能。在研究过程中，我们也揭示LITAF分子与草鱼呼肠孤病毒蛋白的相互作用，阐明LITAF介导的TNF信号通路介入了宿主抗病毒免疫；本研究制备了针对草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP5和VP7的单克隆抗体和多克隆抗体，为本项目对GCRV病毒与宿主之间相互作用的研究提供了免疫学技术支撑，也可用于草鱼呼肠孤病毒临床的免疫学检测。利用这些抗体定量研究了不同株系的草鱼呼肠孤病毒与宿主的相互作用，证实病毒编码蛋白的差异引起了截然不同的细胞病变效应。

项目成果

期刊论文数量（6）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Prokaryotic expression and purification of grass carp reovirus capsid protein VP7 and its vaccine potential
草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白VP7的原核表达纯化及其疫苗潜力
  • DOI：
    10.5897/ajmr11.221
  • 发表时间：
    2011-07
  • 期刊：
    African Journal of Microbiology Research
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    He Yongxing;Yang Qian;Xu Hongxu;Wu Hao;Wu Fangyuan;Lu Liqun
  • 通讯作者：
    Lu Liqun
Suppression of RNA interference pathway in vitro by Grass carp reovirus
草鱼呼肠孤病毒对RNA干扰途径的体外抑制
  • DOI：
    10.1007/s12250-012-3230-4
  • 发表时间：
    2012-04-01
  • 期刊：
    Virologica Sinica
  • 影响因子：
    5.5
  • 作者：
    Guo, Shuai;Xu, Dan;Lu, Li-qun
  • 通讯作者：
    Lu, Li-qun
Quantitative in vivo and in vitro characterization of co-infection by two genetically distant grass carp reoviruses
两种遗传距离较远的草鱼呼肠孤病毒共同感染的体内和体外定量特征
  • DOI：
    10.1099/vir.0.049965-0
  • 发表时间：
    2013-06-01
  • 期刊：
    JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY
  • 影响因子：
    3.8
  • 作者：
    Wang, Tu;Li, Jiale;Lu, Liqun
  • 通讯作者：
    Lu, Liqun
Lipopolysaccharide-induced TNF-a factor in grass carp (Ctenopharyngodon idella): Evidence for its involvement in antiviral innate immunity
草鱼（Ctenopharyngodon idella）脂多糖诱导的 TNF-a 因子：其参与抗病毒先天免疫的证据
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    Fish & Shellfish Immunology
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Wang Hao;Shen Xiaobao;Xu Dan;Lu Liqun
  • 通讯作者：
    Lu Liqun
应用dsRNA测序技术检测草鱼呼肠孤病毒的混合感染
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    上海海洋大学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王土;许丹;吕利群
  • 通讯作者：
    吕利群

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  • 通讯作者：
    吕利群

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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