GNCSC工程化微球移植协同刺激内源性肠神经嵴干细胞修复AG肠神经系统

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81270435
项目类别：
面上项目
资助金额：
70.0万
负责人：
高亚
依托单位：
西安交通大学
学科分类：
H0301.消化系统结构、功能与发育异常
结题年份：
2016
批准年份：
2012
项目状态：
已结题
起止时间：
2013-01-01 至2016-12-31

项目参与者：
段怡涛；郑百俊；秦宏；潘伟康；黄强；王怀杰；余辉；
关键词：
音猬因子受体激动剂肠神经系统 5-HT4 无神经节细胞症人肠神经嵴干细胞

项目摘要

To value the possibility and the future feasibility of the use of autograft cells, investigate the distribution of GNCSC in Hirschsprung's Disease and the phenotype of those cells. Construct Shh/5-HT4 agonist/GNCSC-HAMC cell engineering sphere, observe its function for exogenous stem cells survival and proliferation and its mobilization for endogenous remain GNCSC regeneration to repair and reconstruct the AG ENS. Establish GNCSC proliferation and GFP transfection system in vitro. Provide herein further theory evidence and experimental support for autologous cell transplantation.

本研究系统检测HSCR患儿的GNCGC时空分布和细胞表型，建立GNCSC体外扩增与GFP转染系统，构建shh/5-HT4激动剂/GNCGC-HAMC细胞工程化微球，体内/体外实验观察其促外源性干细胞生存增殖、激活内源性残存肠神经干细胞再生，实现协同修复重建肠神经系统，为实现自体移植修复/恢复ENS系统提供新的研究思路和实验依据。

结项摘要

采用健康的肠神经嵴干细胞/前体细胞替代、修复缺失或无功能神经元可能是治愈肠神经系统疾病有效策略之一。尽管移植后肠神经嵴干细胞/前体细胞能够定植、生存、增殖、迁移和分化，并具有一定程度修复的肠神经系统能力，但也存在定植能力差、生存时间短、增殖有限、分化能力低，缺乏有效的细胞标记，修复后的肠神经系统尚不具有完整调控功能的神经网络等问题。本研究在前期工作（HSCR 患儿p75NTR 免疫阳性神经元切除病变肠管中的时空分布、HSCR患儿肠粘膜层ENS干细胞定位、人胚胎肠神经嵴前体细胞的体外培养及诱导分化、大鼠ENCCs 移植AG 模型鼠8 周内观察）的基础上，通过体外培养新生SD大鼠ENCCs，连续观察并分析在体外培养环境下ENCCs增殖、迁移、凋亡及分化的潜能；利用各种不同时间和浓度的BAC处理实验SD大鼠结肠段，通过大体观察结合组织学结果制作动物模型；评估慢病毒介导eGFP FRG感染对ENCCs增殖、迁移、凋亡以及分化的影响；采用多点注射的方法将上述eGFP阳性 ENCCs注射至动物模型结肠段，并辅以5-HT4受体激动剂MOS，观察移植后内、外源性ENCCs生存、增殖、迁移、分化情况，分析外源性ENCCs移植、5-HT4受体激动剂MOS对残存内源性ENCCs生存、增殖、迁移、分化的影响以及改善肠功能情况，为实现自体移植修复ENS提供新的研究思路和实验依据。主要研究成果如下：①子代ENCCs发育潜能即增殖、迁移潜能逐渐下降，凋亡逐渐上升而神经元方向的分化潜能逐渐下降；② 0.1%-30-min BAC处理SD大鼠在第7天到第84天间可用于制作少神经节细胞症动物模型；③慢病毒介导eGFP FRG可高效地标记ENCCs；④外源性ENCCs移植和协同5-HT4 受体激动剂刺激内源性ENCCs修复ENS功能。总之，本课题的研究为实现简便有效实用的肠神经重建修复策略和方法，研究外源性干细胞移植-内源性肠神经干细胞激活机制的研究提供理论和实验证据。