CYS32 PKA MEASUREMENTS OF MUTANTS THIOREDOXINS W/ ALTERED REDOX POTENTIALS

氧化还原电位改变的突变体硫氧还蛋白的 CYS32 PKA 测量

• 批准号: 6281610
• 负责人: RONALD T RAINES
• 金额: $ 1.67万
• 依托单位: UNIVERSITY OF WISCONSIN-MADISON
• 依托单位国家: 美国
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 美国
• 起止时间: 1998-04-01 至 1999-02-28
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://reporter.nih.gov/project-details/6281610
• 关键词: biological products; biomaterials; biomedical resource; enzymes; nuclear magnetic resonance spectroscopy; proteins

E. coli thioredoxin (Trx) is a general protein disulfide reductant. The Trx active site, at the N-terminus of an ?-helix, consists of Cys-Gly-Pro-Cys. The enzyme converts between dithiol and disulfide redox states. The first thiol (Cys32) has a depressed pKa relative to a typical protein thiol. This pKa can be measured by observing the titration of the C?H and C?H of Cys32 using a 2QF-COSY experiment. We have generated Trx mutants that have perturbed active site disulfide reduction potentials. pH titration of reduced mutant thioredoxins monitored by fluorescence suggest altered pKa's for Cys32. Two-dimensional 1H-NMR (2QF-CSY) of these mutants will allow accurate determination of Cys32 pKa. Physical chemistry suggests that a lower pKa will correlate with a higher (more positive) reduction potential due to stabilization of the dithiol form of Trx.

大肠杆菌硫氧还蛋白 (Trx) 是一种通用蛋白质二硫化物 还原剂。 Trx 活性位点位于 α-螺旋的 N 末端， 由 Cys-Gly-Pro-Cys 组成。 该酶在二硫醇和 二硫化物氧化还原态。 第一个硫醇 (Cys32) 的 pKa 降低 相对于典型的蛋白质硫醇。 该 pKa 可以通过以下方式测量 使用 2QF-COSY 观察 Cys32 的 C?H 和 C?H 的滴定 实验。 我们已经产生了 Trx 突变体，扰乱了活性 位点二硫化物还原电位。 还原突变体的pH滴定 荧光监测的硫氧还蛋白表明 pKa 发生了改变 半胱氨酸32。 这些突变体的二维 1H-NMR (2QF-CSY) 将允许 准确测定Cys32 pKa。 物理化学表明 较低的 pKa 与较高（更积极）的减少相关 由于 Trx 的二硫醇形式的稳定化而具有潜力。