Development of antibody-mimetic libraries by CDR grafting

通过CDR移植开发抗体模拟文库

基本信息

批准号：
22K19376
负责人：
野中元裕
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19376/
关键词：
Nanobody 抗体 CDR ファージディスプレイ

项目摘要

バイオ製剤の投与で体内にて抗薬物抗体が生成されることにより、薬効の低下や予期せぬ副作用などの二次無効化現象が生じることがある。これまで申請者らは、全ての配列がD-アミノ酸で作られた「鏡像低分子化抗体」がマウスモデルにおいてほとんど免疫原性を示さないことが明らかにしてきた。一方、これまで申請者らは、ファージディスプレイ法にて用いた人工ランダム配列ライブラリーでは、結合活性を持つ鏡像抗体のヒット配列を効率良く得ることが困難であった。そこで本研究では、マウスに標的D-タンパク質を免疫し、得られた抗体の超可変領域の配列をNanobody/Monobodyへ移植することを目的とした検討を実施した。ヒット配列を効率的に取得できるようになることで、免疫原性を示さないモダリティの実現に近づけることが期待される。本年度では、ケモカインMCP-1をモデルとして、BALB/cマウスにおいて鏡像MCP-1のフラグメント5種類を用いた免疫を実施した。D-ペプチド単体では抗体価が上がらないことが予想されたため、KLHとのコンジュゲートを用いた。BALB/cマウスに単回腹腔内投与を行った14日後に、血漿を回収し、抗体価を測定した。その結果、C末端領域を含む3種類のD-ペプチドに対しては抗体価の上昇が認められたが、対応するL-ペプチドでは抗体価はほとんど認められなかった。以上の結果から、マウスにおいてD-ペプチドに対する抗体を誘導することが可能であることが明らかとなった。現在、マウスからB細胞を単離し、免疫ライブラリーを作製中であり、今後、マウスIgGのCDR3をNanoody超可変領域に組込んだファージライブラリーを作製する予定である。

由于生物制剂服用后体内会产生抗药物抗体，可能会出现药效下降、副作用等继发性无效现象。迄今为止，申请人已经透露，完全由D-氨基酸组成的“镜像小分子抗体”在小鼠模型中几乎没有表现出免疫原性。另一方面，申请人很难使用噬菌体展示方法中使用的人工随机序列文库有效地获得具有结合活性的镜像抗体的命中序列。因此，在本研究中，我们用目标D蛋白免疫小鼠并进行了研究，目的是将获得的抗体的高变区序列移植到纳米抗体/单体抗体中。通过能够有效地获得命中序列，预计我们将能够更接近实现不表现出免疫原性的模式。今年，以趋化因子MCP-1为模型，用五个镜像MCP-1片段对BALB/c小鼠进行免疫。由于预计单独使用 D 肽不会增加抗体滴度，因此使用了与 KLH 的缀合物。 BALB/c小鼠单次腹膜内给药14天后，收集血浆并测量抗体效价。结果，对于含有C末端区域的三种类型的D肽，观察到抗体效价增加，但对于相应的L肽，几乎没有观察到抗体效价。上述结果表明，在小鼠体内诱导针对D肽的抗体是可能的。我们目前正在从小鼠中分离B细胞并创建免疫文库，未来我们计划创建一个将小鼠IgG的CDR3整合到Nanoody高变区的噬菌体文库。