経静脈投与が可能な虚血性心疾患に対するエクソソーム治療法の開発

开发可静脉注射的治疗缺血性心脏病的外泌体疗法

• 批准号: 22K19563
• 负责人: 濱野 公一
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19563/
• 关键词: 再生医療; microRNA; 血管新生; 細胞外小胞; エクソソーム

本年度は、血管新生能を持つmicroRNAを細胞外小胞に内包させるために、293T細胞にmicroRNAを導入することで、293T細胞が分泌する細胞外小胞に導入したmicroRNAが内包されていることを確認すること、そして、その細胞外小胞の特性を解析した。293T細胞にmicroRNAを導入し、その293T細胞におけるmicroRNAの発現をqPCRで解析することで、microRNAが293T細胞に導入出来たことを確認した。そして、その293T細胞の培養液を回収し、その培養液から細胞外小胞を単離し、その細胞外小胞からmicroRNAを抽出後に、qPCR解析を行ったところ、コントロールと比較して、目的のmicroRNAの内包量が非常に高い値で検出されたことから、血管新生能を持つmicroRNAが内包された細胞外小胞を作製することが出来たと判断した。その血管新生能microRNAを内包した細胞外小胞を、マウス重症下肢虚血モデルの大腿部に移植して2日後に、大腿部の組織を回収してtotal RNAを抽出し、血管新生に関与する遺伝子に対するqPCR解析を行ったところ、解析をした6つの血管新生に関与する遺伝子の発現は、コントロールと比較して、有意に高い値を示した。

今年，为了将具有血管生成潜力的microRNA封装到细胞外囊泡中，我们将microRNA引入293T细胞中，并证实引入的microRNA被封装在293T细胞分泌的细胞外囊泡中，并对细胞外囊泡进行了确认和表征。通过将microRNA导入293T细胞，并通过qPCR分析293T细胞中microRNA的表达，我们证实microRNA可以导入293T细胞。然后，收集293T细胞的培养基，从培养基中分离细胞外囊泡，从细胞外囊泡中提取microRNA，并进行qPCR分析，由于检测到非常大量的microRNA，因此我们得出结论：能够产生含有具有血管生成潜力的 microRNA 的细胞外囊泡。将含有血管生成microRNA的细胞外囊泡移植到严重肢体缺血小鼠模型的大腿后两天，收集大腿组织并提取总RNA，对涉及的基因进行qPCR分析，分析了6个基因的表达。与对照相比，参与血管生成的基因显示出明显更高的值。

项目成果

ラットの食道縫合モデルに対する積層線維芽細胞シートの有効性

层压成纤维细胞片对大鼠食管缝合模型的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 山本直宗;上野耕司;柳原正志;齊藤寿郎;松野祐太朗;池創一;濱野公一
• 通讯作者: 濱野公一