血友病A治癒を目指した血液凝固第VIII因子産生共培養細胞シートの開発と応用

产凝血因子VIII共培养细胞片治疗A型血友病的开发及应用

基本信息

批准号：
22KJ2633
负责人：
小野寺悠
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

血友病Aは、凝固第VIII因子(FVIII)というタンパク質の欠損または活性低下が原因の遺伝性出血性疾患であり、様々な出血症状を呈する。血友病Aの現在の標準治療は、FVIII製剤を静脈投与する補充療法が主であるが、一生涯にわたる頻回投与を要し患者のQOLの低下と莫大な製剤コストが問題となっている。本研究の目的は、血友病A根治療法の確立を目指し、治療域のFVIIIを体内で産生可能な共培養細胞シートの作製法を開発することである。2022年度の検討では、治療に用いる細胞シートを作製するための培養器材の表面設計と、iPS細胞由来の血管内皮前駆細胞(endothelial progenitor cells; EPC)のシート化の検討を行った。想定通り、EPC単独からなる細胞シートは物理的強度が不足しており、シート構造を保ったまま培養皿から剥離することが困難であったことから、共培養の必要性が改めて示された。種々条件検討の結果、EPCを支持する細胞として線維芽細胞や間葉系幹細胞を適切なタイミング・量でEPCと共培養することにより、移植可能なEPCを含む細胞シートを培養皿から剥離させることに成功した。しかし検討を行う中で、iPS細胞から分化誘導したEPCは、細胞シート作製用の温度応答性培養皿への接着性が低いことが明らかとなった。この問題を解決するために培養器材の表面修飾及びコーティング材について種々検討を行い、EPCの接着性に一定の改善がみられる表面条件を見出すことができた。2023年度は、このEPCを含む共培養シートの作製条件をさらに改善し、マウスへの移植・治療効果の確認を行う予定である。

A 型血友病是一种遗传性出血性疾病，由称为凝血因子 VIII (FVIII) 的蛋白质缺乏或活性降低引起，会导致各种出血症状。目前A型血友病的标准治疗主要是静脉注射FVIII制剂的替代疗法，但这需要终生频繁给药，导致患者生活质量下降，制剂成本巨大。本研究的目的是开发一种生产共培养细胞片的方法，该细胞片可以在体内产生治疗性 FVIII，旨在建立血友病 A 的根治性治疗方法。在 2022 年的研究中，我们研究了用于生产治疗用细胞片的培养设备的表面设计，以及源自 iPS 细胞的内皮祖细胞 (EPC) 片的创建。正如预期的那样，仅由EPC制成的细胞片层缺乏物理强度，并且很难在保持片层结构的同时将其与培养皿分离，这再次证明了共培养的必要性。通过研究各种条件，我们发现，通过在适当的时间和数量下将成纤维细胞和间充质干细胞作为支持EPC的细胞与EPC共培养，可以成功地将含有可移植EPC的细胞片从培养皿中剥离。然而，在研究过程中，我们发现，由 iPS 细胞诱导分化的 EPC 对用于生产细胞片层的温度响应性培养皿的粘附性较差。为了解决这个问题，我们对培养设备的表面改性和涂层材料进行了各种研究，并找到了对EPC的粘合性有一定改善的表面条件。 2023年，我们计划进一步改善含有EPCs的共培养片的生产条件，并将其移植到小鼠体内，并确认其治疗效果。