卵巣がんにおける腫瘍浸潤T細胞の免疫不応状態の克服による複合的免疫療法の開発

通过克服卵巢癌肿瘤浸润 T 细胞的免疫难治性开发复合免疫疗法

基本信息

批准号：
22K09604
负责人：
西尾浩
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09604/
关键词：
卵巣がんがん免疫療法免疫寛容がん微小環境

项目摘要

1.anergyを規定するFR4/CD73発現解析FR4/CD73の発現を認める免疫細胞を同定するためにC57BL6健常マウスより末梢リンパ節・脾臓組織を摘出し，各細胞分画をFACS AriaIIによりsortingし，qPCRおよびwestern blot法にてNrn1の発現を解析した．結果：FR4/CD73はTreg(CD4+CD25+FoxP3+)で発現が他の細胞分画と比較し，最も上昇していた．すなわちFR4/CD73は免疫細胞の中でも特にTreg細胞およびanergic T細胞において特異的に発現する分子と考えられた．同様の検討を健常人の末梢血を用いて行った．ヒトでも同様にCD4+FoxP3+の細胞分画で発現が上昇し，特に活性化TregとされるCD44highCD62Llowのpopulationで発現が上昇していることが判明した．一方，naiveCD4, naiveCD8, Bcell, NKcell, 抗原提示細胞での発現は認めなかった．2. 腫瘍浸潤T細胞におけるFR4/CD73の発現解析マウス由来の癌細胞を皮下移植した各種モデルマウスを用いて，がん微小環境でのFR4/CD73の発現を解析した．melanoma細胞株であるB16F10細胞を皮下移植し，十分に腫瘍が大きくなったことを確認し，腫瘍および血液中のCD4+細胞，Treg細胞(CD25+細胞)をFACS AriaIIを用いてsortingし，qPCRによりmouse FR4/CD73の発現を検討した．結果：腫瘍浸潤Tregで最も発現が亢進していた．以上の結果よりFR4/CD73はTreg細胞，特に腫瘍に浸潤するTregにおいて特異的に発現を認める分子であることが判明した．

1. 定义无反应性的 FR4/CD73 表达分析为了鉴定表达 FR4/CD73 的免疫细胞，从 C57BL6 健康小鼠中取出外周淋巴结和脾组织，并通过 FACS Aria II 分选每个细胞部分，并使用 qPCR 分析 Nrn1 表达。和蛋白质印迹。结果：与其他细胞组分相比，FR4/CD73 的表达在 Tregs (CD4+CD25+FoxP3+) 中最高。换句话说，FR4/CD73被认为是免疫细胞中Treg细胞和无能T细胞特异性表达的分子。使用健康个体的外周血进行了类似的研究。在人类中，同样发现 CD4+FoxP3+ 细胞部分中的表达升高，特别是在 CD44highCD62Llow 群体中，该群体被认为是激活的 Tregs。另一方面，在初始CD4、初始CD8、B细胞、NK细胞或抗原呈递细胞中未观察到表达。 2.肿瘤浸润T细胞中FR4/CD73的表达分析我们使用皮下移植小鼠来源的癌细胞的各种模型小鼠，分析了癌症微环境中FR4/CD73的表达。将黑色素瘤细胞系B16F10细胞皮下移植，确认肿瘤已充分生长，并使用FACS Aria II分选血液中的CD4+细胞和Treg细胞，并检查小鼠的表达。 FR4/CD73。结果：肿瘤浸润性 Tregs 中的表达升高最多。上述结果表明，FR4/CD73是Treg细胞，尤其是浸润肿瘤的Treg细胞中特异性表达的分子。