Clinical application of biomarkers such as Chromogranin B in Parkinson's syndrome

嗜铬素B等生物标志物在帕金森综合征中的临床应用

基本信息

批准号：
22K07397
负责人：
瀧川洋史
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

パーキンソン症候群(PS)は，原因不明の進行性の神経変性疾患であり，未だに有効な治療法はない．PSでは多彩な臨床像のために臨床診断が困難な場合が少なくない．脳脊髄液を用いた網羅的な質量分析，血清中のmicroRNAを用いたアレイ解析等によってPSのひとつである進行性核上性麻痺（PSP）に特異的なバイオマーカー候補としてChromogranin B(CHGB)，アミロイド前駆タンパク（APP）を含めた複数の候補分子，疾患特異的microRNA候補を得てきた．候補分子については，細胞骨格，翻訳後修飾などのpathwayとの関連が明らかとなった．本研究では，PSの早期診断，病態解明，治療戦略に資するバイオマーカーを確立することを目的としている．PSPに特異的な変化を示すCHGBのバリアントであるbCHGB_6255について，神経系培養細胞より回収したライセートからの免疫沈降法による精製では，微量のためにアミノ酸配列を解析するのに十分量を得ることは困難であった．そこでタグを付したCHGBを神経系培養細胞に強制発現させる系の確立を試みたが，発現効率が極めて悪く，実験条件の検討を行った．APPのN末側，C末側に対する抗体を用いたWestern blotting法によって得られたPSPに特異的な変化を示す2種類のバリアントについて多数例での解析を進めた．一方，PSP特異的microRNAについては，血清中のmicroRNAを用いたqPCRによる多数例での検証研究を行い，1種類のmicroRNAにおいてPSP群と対照群において有意差を確認した．中枢神経におけるmicriRNAの発現を解析するために剖検脳から抽出したmicroRNAに対するqPCR，あるいは，剖検脳標本に対するin situ hybridization，免疫組織化学染色による二重染色による解析を行った．

帕金森综合症（PS）是一种原因不明的进行性神经退行性疾病，目前尚无有效的治疗方法。由于临床表现多种多样，PS 的临床诊断通常很困难。嗜铬粒蛋白 B (CHGB) 被确定为进行性核上性麻痹 (PSP)（一种 PS）的特异性生物标志物候选物，通过使用脑脊液的综合质谱分析和使用血清中的 microRNA 的阵列分析，我们获得了包括淀粉样蛋白前体在内的多个候选分子。蛋白质 (APP) 和疾病特异性 microRNA 候选物。关于候选分子，与细胞骨架和翻译后修饰等途径的关系已经阐明。本研究的目的是建立有助于 PS 早期诊断、病理生理学阐明和治疗策略的生物标志物。对于显示PSP特异性变化的CHGB变体bCHGB_6255，由于微量，很难从培养的神经系统细胞收集的裂解物中通过免疫沉淀纯化来获得足够的量来分析氨基酸序列。因此，我们试图建立一个系统，在培养的神经细胞中强制表达标记的CHGB，但表达效率极低，因此我们对实验条件进行了研究。我们使用大量病例，使用针对 APP N 末端和 C 末端的抗体，通过蛋白质印迹法分析了两种类型的显示 PSP 特异性变化的变异。另一方面，对于PSP特异的microRNA，我们使用qPCR在多个病例中使用血清microRNA进行了验证研究，并确认了PSP组和对照组之间的一种类型的microRNA存在显着差异。为了分析中枢神经系统中的 microRNA 表达，我们对从尸检脑中提取的 microRNA 进行了 qPCR，对尸检脑标本进行了原位杂交，并使用免疫组织化学染色进行了双重染色。