The role and molecular mechanism of NAT10, an RNA-modifying enzyme, in colorectal cancer.

RNA修饰酶NAT10在结直肠癌中的作用和分子机制。

• 批准号: 22K07201
• 负责人: 三城 恵美
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07201/
• 关键词: 翻訳後修飾; 大腸がん; プロテオミクス; RNA修飾

大腸がんの新しい治療標的を探索する目的で、家族性大腸腺腫症およびそのマウスモデルの腫瘍を用いて解析し、その中から翻訳後修飾のひとつであるアセチル化修飾に着目した。さらにアセチル化修飾に変化のあるRNA修飾酵素NAT10に着目し、さらにNAT10の阻害は大腸がん細胞の増殖を強く抑制することを見出していた。本研究では、NAT10が腫瘍組織内で活性化していることを明らかにし、大腸がん細胞の生存・増殖に関与する分子メカニズムを解明することを目的とし、本研究成果がNAT10阻害による大腸がん新規治療の開発につながることを期待している。A）NAT10のRNAアセチラーゼ活性が大腸がん細胞の生存・増殖に果たす役割の検討研究分担者の多大なる協力の下、大腸がん細胞におけるドキシサイクリン誘導性NAT10の発現抑制系の作製に成功し、ドキシサイクリン誘導的にNAT10の発現を抑制したところ、細胞増殖の抑制を確認することができた。さらに、NAT10発現抑制細胞株のRNAを単離し、RNAアセチル化シチジン（ac4C）認識抗体やそれ以外のRNAメチル化認識抗体を用いて検出したところ、実際にRNAアセチル化シチジンが特異的に減少していることも確認でき、逆に発現抑制を解除すると28Sから回復するが増殖抑制はなかなか回復しないことを確認した。これらのNAT10発現調節細胞をプロテオーム解析することにより、細胞内で起こっている現象を解明して腫瘍化メカニズムを明らかにしようとしており、核や転写因子に関与するタンパク質に変動が見られるような興味深いタンパク質で有意に差のある結果を得つつある。現在は、プロテオーム解析上の前処理や測定の最適化に取り組み、新しい解析手法を検討しながらより良い結果を得られるよう工夫を重ねている。

为了寻找结直肠癌的新治疗靶点，我们分析了家族性腺瘤性息肉病及其小鼠模型的肿瘤，并重点关注翻译后修饰之一的乙酰化。他们还关注了RNA修饰酶NAT10，该酶的乙酰化发生了变化，发现抑制NAT10可以强烈抑制结肠癌细胞的增殖。在这项研究中，我们旨在阐明 NAT10 在肿瘤组织内被激活，并阐明与结直肠癌细胞存活和增殖相关的分子机制，我们希望这将有助于开发新的治疗方法。 A) 检查NAT10的RNA乙酰化酶活性在结直肠癌细胞的存活和增殖中的作用在我们的共同研究人员的大力合作下，我们成功地创建了一个抑制结直肠癌中多西环素诱导的NAT10表达的系统当强力霉素诱导抑制 NAT10 表达时，我们能够证实细胞增殖受到抑制。此外，当我们从NAT10表达受到抑制的细胞系中分离RNA并使用识别RNA乙酰化胞苷（ac4C）的抗体和其他识别RNA甲基化的抗体进行检测时，我们发现RNA乙酰化胞苷实际上特异性减少。证实当去除表达抑制时28S恢复，但生长抑制恢复缓慢。通过对这些 NAT10 表达调节细胞的蛋白质组学分析，我们试图阐明细胞内发生的现象并阐明其致瘤机制，我们得到的结果具有显着的蛋白质差异。目前，他正致力于优化蛋白质组分析的预处理和测量，并正在考虑新的分析方法以获得更好的结果。

项目成果

ITbM分子構造センター

ITbM分子结构中心