CD6の多段階的、双方向的なT細胞活性調節機構の解明と抗腫瘍免疫応答への応用

CD6对T细胞活性多级双向调控机制的阐明及其在抗肿瘤免疫反应中的应用

基本信息

批准号：
22K07124
负责人：
竹内新
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07124/
关键词：
T細胞活性化免疫シナプス分子イメージング

项目摘要

T細胞の活性化は、予想以上に多くの抑制分子によって厳重に管理されている。T細胞の持続的な活性化が鍵となるがん免疫治療においては、それらの抑制を効率的に排除し、T細胞の抑制＝疲弊をいかに回避できるかが大きな課題であり、各因子の制御機構の解明が重要である。本研究では、T細胞上に発現する制御因子CD6と、そのリガンドとして報告されている２種類の分子に焦点をあて、1細胞1分子イメージングによる解析を用いてT細胞活性化制御機構を時空間的な視点から明らかにし、免疫療法開発の基盤を創出することを目的とする。初年度はCD6と既知のリガンドであるCD166及びCD318との結合を確認をすると共に、リガンドを組み入れた人工脂質二重膜の作成を試みた。この人工脂質二重膜は、リガンドが存在した状況下におけるCD6の分子動態イメージングを行う際に必要となる。初めに、リガンドの結合を確認する目的でリガンドとヒト抗体のFc融合タンパク質を作成した。CD6を発現させた細胞と反応させたところ、CD6とCD166の間には明らかな結合が認められた。この結合はヒトーマウス分子間でも認められ、異種間の分子でも機能することが確認できた。一方、CD318とCD6の間には報告されている結合を認めることができなかった。これらの結果はリガンドを細胞に発現させて細胞間の接着で確認した際にも同様であったことから、本研究ではCD6とCD166との結合に焦点を絞ることにした。次にCD166を組み入れた人工脂質二重膜の作成を試みた。しかし、構造的な問題から従来の方法ではCD166が人工脂質二重膜にうまく取り込まれず、新たな手法で作成する必要が生じた。脂質の種類、タンパク質、共に条件検討を重ねた結果、CD166を組み入れた人工脂質二重膜を作成することに成功した。

T 细胞的激活受到比预期更多的抑制分子的严格控制。在癌症免疫治疗中，T细胞的持续激活是关键，如何有效消除其抑制并避免T细胞抑制=耗竭，以及阐明其机制非常重要。在本研究中，我们重点研究了T细胞上表达的调节因子CD6以及已报道为其配体的两类分子，并利用单细胞、单分子成像来阐明T细胞激活控制的时空机制。目的是从临床角度阐明这一点，为免疫疗法的发展奠定基础。第一年，我们确认了CD6与已知配体CD166和CD318之间的结合，并尝试创建掺有配体的人工脂质双层膜。这种人工脂质双层对于在配体存在的情况下对 CD6 的分子动力学进行成像是必需的。首先，为了确认配体的结合，创建了配体和人抗体之间的Fc融合蛋白。当与表达 CD6 的细胞反应时，观察到 CD6 和 CD166 之间有明显的结合。在人类和小鼠分子之间也观察到了这种结合，证实它也与不同物种的分子一起发挥作用。另一方面，无法观察到报道的 CD318 和 CD6 之间的结合。当配体在细胞中表达并通过细胞-细胞粘附证实时，这些结果是相似的，因此在本研究中，我们决定重点关注 CD6 和 CD166 之间的结合。接下来，我们尝试创建包含 CD166 的人工脂质双层膜。然而，由于结构问题，CD166无法使用传统方法整合到人工脂质双层膜中，因此需要一种新的方法来制造它。通过反复检查脂质和蛋白质的类型条件，他们成功地制造出了掺有 CD166 的人工脂质双层膜。