新規NFAT活性化因子Nfam-1のin vivoにおける機能解析

新型 NFAT 激活剂 Nfam-1 的体内功能分析

基本信息

批准号：
15790257
负责人：
竹内新
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790257/
关键词：
NFAT Nfam-1 ノックアウトマウス顆粒球キメラ分子

项目摘要

本研究では、新規NFAT活性化分子として単離したNfam-1が生体内でリンパ球の分化や免疫応答にどのように関与するのか、Nfam-1遺伝子導入マウスや欠損マウスを用いて解明することを目的としている。これまでのNfam-1欠損マウスのT、B細胞を主とした表現型の比較及び機能解析では、いずれの細胞の解析においても、野生型マウスとの間に明確な違いは認められず、新たな実験系の検討が課題であった。T、B細胞と類似のシグナル伝達系が存在している顆粒球にNfam-1が最も強く発現していることが判明し、顆粒球の機能解析を通してNfam-1作用機序の解明を目指した。fMLP、TNFα刺激により放出される活性酸素量を比較し、インテグリン依存性のシグナル伝達系について検討したが、欠損マウス由来の顆粒球にも野生型と同程度の活性化が認められた。更にTNFα刺激によるインテグリンの活性化、発現上昇についても検討したが、こちらも同程度であった。インテグリンを介したインサイドアウト、アウトサイドインシグナルへのNfam-1の関与は低い可能性が示唆された。一方、直接NFATの活性化に関与する系の解析として、Fcレセプター、fMLP刺激によるカルシウムの流入の測定を行った。Nfam-1がNFAT活性化に関与する分子であることから、欠損マウスでの活性の低下が期待されたが、どちらの刺激においても野生型マウスとの差を認めることは出来なかった。以上より、遺伝子導入マウスや細胞の解析からNfam-1がNFATの活性化に関与し、B細胞の分化に重要な役割を果たしていることが解明されたが、欠損マウスからの解析においては、野生型マウスとの間に明確な違いを認めることは出来なかった。異なるシグナル伝達分子がNfam-1と代用されることで、複雑な免疫応答反応を維持している可能性が示唆された。

在本研究中，我们将使用 Nfam-1 转基因小鼠和无效小鼠来阐明 Nfam-1 作为一种新型 NFAT 激活分子如何参与体内淋巴细胞分化和免疫反应。在对 Nfam-1 缺陷型小鼠（主要是 T 细胞和 B 细胞）的表型进行比较和功能分析时，在任何细胞分析中均未观察到它们与野生型小鼠之间存在明显差异。面临的挑战是考虑合适的实验。系统。研究发现，Nfam-1 在粒细胞中表达最强，粒细胞具有与 T 细胞和 B 细胞相似的信号转导系统，我们旨在通过粒细胞的功能分析来阐明 Nfam-1 的作用机制。我们比较了 fMLP 和 TNFα 刺激释放的活性氧量，并研究了整合素依赖性信号转导系统，发现来自缺陷小鼠的粒细胞被激活到与野生型相同的程度。此外，我们还研究了TNFα刺激引起的整合素激活和表达增加，但结果也相似。有人认为，Nfam-1 对整合素介导的由内而外和由外而内信号的参与可能较低。另一方面，为了分析直接参与 NFAT 激活的系统，我们测量了 Fc 受体和 fMLP 刺激的钙流入。由于 Nfam-1 是参与 NFAT 激活的分子，因此预计缺陷小鼠的活性会降低，但与野生型小鼠相比，两种刺激均未观察到差异。综上所述，对转基因小鼠和细胞的分析表明，Nfam-1参与NFAT激活，并在B细胞分化中发挥重要作用，在两种类型的小鼠之间没有观察到明显的差异。结果表明，不同的信号分子可能取代 Nfam-1 以维持复杂的免疫反应。