レンサ球菌高病原化変異株が分泌するaromatic-rich ペプチドの機能解析

高致病性链球菌突变株分泌的富含芳香肽的功能分析

基本信息

批准号：
22K07083
负责人：
竹本訓彦
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Center for Global Health and Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07083/
关键词：
高病原化変異 A群レンサ球菌

项目摘要

SapA1の機能評価を行うため6x His タグを付加したSapA1及び6x His-SapA1の持つ芳香族アミノ酸残基をアラニンに置換した変異体(SapA1Amut)をレンサ球菌で発現させる発現系を構築し、それぞれのペプチドの発現精製に成功した。また、SapA1の発現量変動を検討するため、SapA1に特異的な抗体の作製を行なった。得られた抗体はSapA1を検出するものの、SapA1Amutには反応性を示さず、特異的な抗体が得られていることを確認できた。得られた抗体を用いて、同一患者由来の臨床分離株であるCovS変異体とCovS野生型の２株の培養上清に含まれるSapA1の量を検討したところ、CovS変異体でのみシグナルが検出された。CovS変異は高病原化を伴うことが知られており、SapA1の過剰産生が高病原化の一因である可能性が示された。一方、emm1型株に特異的に保存されているSapA3については、人工ペプチド合成受託企業に合成を依頼したが、配列上、合成が不可能であるとのことで抗体作製に進むことができていない。予備的解析ではゲノム上の限られた領域にかたまって存在するSap遺伝子群領域の全体を欠損させた株を作製し、病原性解析を行なっていたが、SapA1の詳細な機能解析を進めるため、Sap遺伝子群の中のsapA1遺伝子のみを欠損したsapA1欠損株を作製した。得られた株の増殖速度を野生株、Sap全域欠損株と比較したが、影響は見られなかった。

为了评估SapA1的功能，我们构建了一个表达系统，其中6x His-tagged SapA1和6x His-SapA1的芳香族氨基酸残基被丙氨酸取代的突变体（SapA1Amut）在链球菌中成功表达。和肽的纯化。此外，为了检查SapA1表达水平的变化，我们制备了SapA1特异性抗体。所得抗体虽然检测到SapA1，但与SapA1Amut没有反应性，确认得到了特异性抗体。使用获得的抗体，我们检查了来自同一患者的两种临床分离株（CovS突变型和CovS野生型）的培养上清液中所含的SapA1的量，并且仅在CovS突变型中检测到了信号。已知 CovS 突变与高致病性相关，并且研究表明 SapA1 的过量产生可能是高致病性的一个促成因素。另一方面，对于emm1型菌株中特异保守的SapA3，我们委托人工肽合成合同公司进行合成，但被告知由于序列原因无法合成，因此无法进行合成。继续进行抗体生产。在初步分析中，我们创建了将集中在基因组上有限区域的整个Sap基因组区域删除的菌株，并进行了致病性分析，但为了对SapA1进行详细的功能分析，我们创建了sapA1缺陷菌株，其中仅删除了Sap基因组中的sapA1基因。将获得的菌株的生长速率与野生型菌株和Sap全缺失菌株的生长速率进行比较，但没有观察到效果。