Development of new therapeutic strategy against renal interstitial fibrosis utilizing mTOR inhibitor

利用 mTOR 抑制剂开发抗肾间质纤维化的新治疗策略

基本信息

批准号：
22K06736
负责人：
増田智先
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Himeji Dokkyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、腎移植患者及び肝移植患者双方における低用量CNIとエベロリムスの併用を念頭に、CNIによる腎病変の分子機構解明と並行してエベロリムスによる腎間質の線維化抑制の分子機構解明を目的とした。当初予定していた通り、ラットを用いたin vivo動物実験系ならびにラット腎由来培養細胞（NRK52［上皮細胞］、NRK49F［線維芽細胞］）を用いた系統的な検討を進め、腎間質の線維化に起因する慢性腎臓病の増悪とmTOR阻害薬の使用による治療効果の過程において、HE4の発現がどのように関連し、どのような役割を示すのかについて解析を進めている。（１）in vivo動物実験系：すでに確立された慢性腎不全モデルラット（5/6腎摘出ラット）を用い、タクロリムスにエベロリムスを併用して、人感室の加速度的な進行とエベロリムス併用による線維化の抑制効果、すなわち腎保護効果の評価を行っている。病変進展に及ぼすタクロリムスの影響（病変の重篤化等）ならびにエベロリムスの影響について、腎間質の線維化マーカーαSMA（alpha-smooth muscle cell actin）の変化、外因的に投与した蛍光標識アルブミンの再吸収能等を指標として調べている。なお、エベロリムスの効果については活性化（リン酸化）mTORの基質であるS6キナーゼのリン酸化を指標として定量数値化する予定である。（２）in vitro培養細胞系：ラット腎間質線維芽細胞由来培養細胞NRK49Fを用いて、TGFb刺激による筋線維芽細胞への形質転換過程と活性化、筋線維芽細胞におけるαSMAの産生と消失に及ぼすエベロリムス、タクロリムスの影響を調べる予定である。並行して、ラット腎近位尿細管由来培養細胞NRF52に及ぼす両薬物の影響（特に細胞毒性、解毒反応に及ぼす影響）について、細胞内受容体FKBP1A（FK506 binding protein 12kDa, 別名FKBP12）との複合体形成を中心に調べ、in vivo動物実験の分子レベルでの再現と評価を行うことを想定している。

本研究旨在阐明依维莫司抑制肾间质纤维化的分子机制，同时阐明CNI引起肾脏病变的分子机制，以期小剂量CNI联合依维莫司对肾脏和肝脏的影响移植患者的目的。按照最初的计划，我们使用大鼠和大鼠肾脏来源的培养细胞（NRK52[上皮细胞]、NRK49F[成纤维细胞]）进行了体内动物实验系统的系统研究，并研究了肾间质的影响，目前正在分析。 HE4表达与纤维化引起的慢性肾脏病恶化过程中的关系及作用以及mTOR抑制剂的治疗作用。（1）体内动物实验系统：使用已建立的慢性肾衰竭模型大鼠（5/6肾切除大鼠），依维莫司与他克莫司联合使用，联合引起的人体敏感室和纤维进展加速我们目前正在评估依维莫司抑制癌症发展的效果，即保护肾脏的效果。关于他克莫司对病变进展（增加病变严重程度等）和依维莫司的影响，研究了肾间质纤维化标志物α平滑肌细胞肌动蛋白（αSMA）的变化以及外源性荧光标记白蛋白的反应性。我们正在研究吸收能力等作为指标。依维莫司的作用将使用 S6 激酶（激活（磷酸化）mTOR 的底物）的磷酸化作为指标进行定量量化。 (2)体外培养细胞系统：使用大鼠肾间质成纤维细胞来源的培养细胞NRK49F，通过TGFb刺激、肌成纤维细胞中αSMA的产生和消失，向肌成纤维细胞的转化过程和活化，我们计划研究依维莫司和他克莫司对肌成纤维细胞的影响同时，我们研究了这两种药物与细胞内受体 FKBP1A（FK506 结合蛋白 12kDa，也称为 FKBP12）组合对大鼠肾近曲小管来源的培养 NRF52 细胞的影响（特别是对细胞毒性和解毒反应的影响）。目的主要是研究身体形成并在分子水平上重现和评估体内动物实验。

项目成果

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专利数量（0）

免疫抑制薬血中濃度測定の全国QCサーベイ2021の報告

2021年全国免疫抑制药物血浓度测定质量控制调查报告

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
増田智先
通讯作者：
増田智先

Fischer-Bosch Institute(ドイツ)

费歇尔博世研究所（德国）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

免疫抑制薬コントロールサーベイ報告：2016~2021年度

免疫抑制药物管制调查报告：2016-2021年

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
増田智先;林真紀;谷川原祐介
通讯作者：
谷川原祐介

Effect of Itraconazole and Its Metabolite Hydroxyitraconazole on the Blood Concentrations of Cyclosporine and Tacrolimus in Lung Transplant Recipients

伊曲康唑及其代谢物羟基曲康唑对肺移植受者环孢素和他克莫司血药浓度的影响

DOI：
10.1248/bpb.b21-00738
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
2
作者：
Matsuda Yuya;Nakagawa Shunsaku;Yano Ikuko;Masuda Satohiro;Imai Satoshi;Yonezawa Atsushi;Yamamoto Takashi;Sugimoto Mitsuhiro;Tsuda Masahiro;Tsuzuki Tetsunori;Omura Tomohiro;Nakagawa Takayuki;Chen;Nagao Miki;Date Hiroshi;Matsubara
通讯作者：
Matsubara

Impact of very early introduction of everolimus on liver regeneration after partial liver transplantation in rats

早期使用依维莫司对大鼠部分肝移植后肝再生的影响

DOI：
10.1002/jhbp.1310
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
3
作者：
Hirata Masaaki;Yagi Shintaro;Ito Takashi;Masano Yuki;Miyachi Yosuke;Yao Siyuan;Sonoda Mari;Masuda Satohiro;Haga Hironori;Hatano Etsuro
通讯作者：
Hatano Etsuro