糸状菌の細胞表層動態を可視化する～新しい薬剤標的スクリーニング系の開発に向けて～

丝状真菌细胞表面动态可视化〜致力于开发新的药物靶标筛选系统〜

基本信息

批准号：
22K06600
负责人：
田中大
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tohoku Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

令和４年度は、オーキシンデグロンシステムを利用したプロテインノックダウン実験系をAspergillus fumigatus に実装するための、技術基盤整備に着手した。特に、オーキシンデグロンの主要構成要素である OsTIR1 遺伝子を Aspergillus 属の恒常発現プロモーター PkpiA や誘導発現プロモーター PglaAの下流で制御するように発現ベクターを組換えつつ、OsTIR1 タンパク質をコードする塩基配列のコドン最適化を検討することで、Aspergillus 属真菌における TIR1 タンパク質発現レベルの改善に成功した。同時並行で、本菌のプロテインノックダウンのよりよい遺伝子標的を探す目的で、細胞壁ガラクトマンナン生合成にかかわる遺伝子を探していたところ、それぞれ独立にガラクトマンナン生合成を担う Mnt1、AnpAを同定し、査読付き英語論文誌にて報告した (Kadooka et al., Glycobiology, 2023; Kadooka et al., mSphere, 2023)。Mnt1は糖タンパク質型ガラクトマンナン、AnpAは糸状菌型コアマンナンの生合成に寄与していた。anpA遺伝子欠損株では、既知の cmsA 遺伝子欠損株と同じレベルでコアマンナン構造が高度に破壊されるが、cmsA遺伝子欠損株で見られるような高度の菌糸生育異常は観察されない。このことは、コアマンナン構造の破壊と糸状菌型生育が必ずしも相関しないことを示唆する。プロテインノックダウンの標的としてAnpAを試してみることで、コアマンナン構造と菌糸型生育の相関関係をより深く理解することができるだろう。

2020 财年，我们开始开发技术基础设施，以利用烟曲霉中的生长素降解决定子系统实施蛋白质敲低实验系统。特别地，我们重组了表达载体，以控制曲霉属组成型表达启动子PkpiA和诱导型表达启动子PglaA下游的生长素降解决定子的主要成分OsTIR1基因，并优化了编码OsTIR1的核苷酸序列的密码子。通过研究该方法的效果，我们成功提高了曲霉属真菌中的 TIR1 蛋白表达水平。与此同时，我们正在寻找参与细胞壁半乳甘露聚糖生物合成的基因，以便找到该细菌中蛋白质敲除的更好的基因靶标，我们鉴定了Mnt1和AnpA，它们各自独立地负责半乳甘露聚糖生物合成。同行评审的英文期刊（Kadooka 等人，Glycobiology，2023；Kadooka 等人，mSphere，2023）。 Mnt1有助于糖蛋白型半乳甘露聚糖的生物合成，AnpA有助于丝状真菌型核心甘露聚糖的生物合成。在anpA基因缺陷菌株中，核心甘露聚糖结构被高度破坏至与已知cmsA基因缺陷菌株相同的水平，但没有观察到cmsA基因缺陷菌株中所见的高度异常菌丝生长。这表明核心甘露聚糖结构的破坏和丝状真菌的生长不一定相关。使用 AnpA 作为蛋白质敲低靶点进行实验将有助于我们更好地了解核心甘露聚糖结构与菌丝生长之间的关系。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification of galactofuranose antigens such as galactomannoproteins and fungal-type galactomannan from the yellow koji fungus (Aspergillus oryzae)

呋喃半乳糖抗原的鉴定，例如来自黄曲真菌（米曲霉）的半乳甘露糖蛋白和真菌型半乳甘露聚糖

DOI：
10.3389/fmicb.2023.1110996
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
5.2
作者：
Kadooka Chihiro;Tanaka Yutaka;Hira Daisuke;Maruyama Jun;Goto Masatoshi;Oka Takuji
通讯作者：
Oka Takuji

酵母Yarrowia lipolyticaにおける細胞壁および分泌糖タンパク質のN-型糖鎖構造の解析

解脂耶氏酵母细胞壁 N-聚糖结构和分泌糖蛋白的分析