カルシウム結合タンパク質Ｅｆｐ遺伝子改変マウスを用いた自己免疫性関節炎の研究

钙结合蛋白Efp基因修饰小鼠对自身免疫性关节炎的研究

基本信息

批准号：
15J05761
负责人：
井上真以亜
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J05761/
关键词：
自己反応性T細胞レパトア免疫 T細胞自己免疫

项目摘要

本課題では、自己免疫性関節炎発症の根幹である自己反応性T細胞の発生機構を明らかにすることを目指す。以下に、【１】胸腺におけるT 細胞レパトア制御機構の解析と、【２】末梢T細胞の活性化に寄与する翻訳後修飾分子の解析について報告する。【１】カルシウム結合タンパク質Efpによる胸腺細胞の分化制御：Efp欠損による胸腺細胞の正負の選択への影響の評価、及びEfpの下流分子の特定に取り組んだ。Efp下流分子に関しては、特に関節リウマチの疾患感受性が報告されている遺伝子に着目し、EfpによるT細胞レパトア制御に関わる因子の検討を進めた。具体的な方法としては、Efp欠損胸腺細胞にて発現上昇した遺伝子をレトロウイルスベクターにより胸腺細胞に導入した後、胎児胸腺器官培養系にて分化させることで、過剰発現により正負の選択が障害される遺伝子を選定した。今後、候補遺伝子に対する遺伝子欠損マウスの作製し、T細胞レパトア制御を生体レベルで検証することを目指す。【２】新規翻訳後修飾分子によるT細胞の活性制御：TCR刺激に伴って発現上昇する、特定の翻訳後修飾酵素のT細胞特異的遺伝子欠損マウスの解析を行った。当該分子は、iNKT細胞の早期分化と、末梢のCD4およびCD8T細胞の活性化に重要であることが示された。さらにRNA-seq解析やフローサイトメトリー法を用いて、当該分子の下流で制御される遺伝子や、翻訳後修飾の基質を特定した。以上の結果により、当該翻訳後修飾分子の制御異常が、末梢T細胞の異常な活性化に関連する可能性が考えられた。

在这个项目中，我们的目标是阐明自身反应性T细胞的产生机制，这是自身免疫性关节炎发展的基础。下面，我们报告 (1) 胸腺中 T 细胞库控制机制的分析和 (2) 有助于外周 T 细胞激活的翻译后修饰分子的分析。 [1] 钙结合蛋白 Efp 对胸腺细胞分化的调节：我们评估了 Efp 缺陷对胸腺细胞正向和负向选择的影响，并致力于鉴定 Efp 的下游分子。关于 Efp 的下游分子，我们重点研究了据报道对类风湿性关节炎特别敏感的基因，并研究了 Efp 控制 T 细胞库的相关因素。具体而言，使用逆转录病毒载体将在Efp缺陷的胸腺细胞中表达增加的基因引入胸腺细胞，然后在胎儿胸腺器官培养系统中分化，由此过度表达损害正选择和负选择。未来，我们的目标是培育候选基因的基因缺陷小鼠，并在生物水平上验证 T 细胞库控制。 [2] 新型翻译后修饰分子对 T 细胞活性的调节：我们分析了 T 细胞特异性基因缺失的小鼠，寻找特定翻译后修饰酶，这些酶的表达随着 TCR 刺激而增加。该分子被证明对于 iNKT 细胞的早期分化以及外周 CD4 和 CD8 T 细胞的激活非常重要。此外，利用 RNA-seq 分析和流式细胞术，他们鉴定了分子下游调节的基因和翻译后修饰的底物。基于上述结果，认为翻译后修饰分子的异常调控可能与外周T细胞的异常活化有关。