ラマン分光法によるＡｌｚｈｅｉｍｅｒ病凝集タンパク質の定量的測定技術の開発

利用拉曼光谱法开发阿尔茨海默病聚集蛋白定量测量技术

基本信息

批准号：
13J06016
负责人：
長島優
金额：
$ 2.76万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-26 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J06016/
关键词：
アルツハイマー病ラマン分光法アミロイドβ ラマン分光

项目摘要

１．ラマン分光法を用いた振動スペクトル測定装置の構築(i). レーザー光源安定性の向上：本研究では、レーザーラマン分光顕微鏡の光源として、ECDL(external cavity diode laser)モジュールを自作し、レーザー発振を安定化させるために必要な定電流ドライバおよびレーザーダイオード温度コントローラを自作した。レーザーダイオード(LD)の温度を一定に保つことで、ラマンスペクトル測定の際の測定基準となる光源波長を固定することが可能である。今年度は温度安定化のためのPID制御機構を達成するマイコンプログラムの改良を進めており、±0.3℃であったLDの温度変動を±0.12℃程度まで安定化できるようになった。(ii). レーザーラマン分光顕微鏡の製作：可視光用の冷却CMOSを用いた昨年度までの検出系では、微量な生体サンプル・薄い病理切片の観測には測定感度が十分でないことが判明し、近赤外用の冷却CCDを新たに導入し、市販のレーザーラマン分光顕微鏡とほぼ同等のS/N比での測定が可能となりつつある。2. 組織中での振動スペクトル測定技術の開発：ヒト剖検脳中での老人斑の振動スペクトル取得のためには、非染色試料で振動スペクトル画像取得後、免疫染色を行い老人斑を同定し、老人斑のある画素での振動スペクトルを同定する。振動スペクトル測定と免疫染色画像の撮影の間に、免疫染色操作が入るため、二つの測定を同じタイミングで連続して行うことはできない。この解決のためには、先に振動スペクトル測定した部位と同じ標本上の場所を、免疫染色後に定位するための位置あわせ技術が必要になる。本研究では、明視野画像から自動で検出した細胞の輪郭を免疫染色前後で比較し、互いにsuperimposeすることで、免疫染色後にはじめて確認できる老人斑の位置を、振動スペクトル画像上で特定する画像処理プログラムを製作した。

1。使用拉曼照明方法（i）构建振动频谱测量设备。并创建了激光振荡。通过保持激光二极管（LD）常数的温度，可以固定光源波长，这是拉曼光谱测量值的测量标准。今年，正在改进微型计算机计划以实现PID控制机制以进行温度稳定，并且LD在±0.3°C下的温度波动可以稳定在约±0.12°C。（ii）正在引入新的用于红外的冷却CCD，并且在S/N比率下的测量值与市售激光拉曼分区显微镜几乎相同。 2。组织中的振动光谱测量技术：为了获得人类解剖学脑中旧的人类斑点的振动谱，在获得非阳性样品的振动谱图像之后，确定了免疫染色，并确定了整个老年人带有像素的振动光谱，带有像素和老人。由于在振动光谱测量和免疫图像拍摄之间输入了免疫素染色操作，因此不能同时连续进行两次测量。为了解决该溶液，必须将定位位置位于与免疫综合后先前测得的振动光谱相同的标本上。在这项研究中，在免疫图之前和之后比较了从透明场图中检测到的细胞的轮廓，并且通过彼此叠加，在振动光谱图像上鉴定出图像处理，仅在免疫IN后才能确认一个程序。