卵の発育に特化した卵胞発達の分子内分泌学的解析とその体外培養系への応用

卵泡发育特异性的分子内分泌学分析及其在体外培养系统中的应用

基本信息

批准号：
13J11037
负责人：
川島一公
金额：
$ 3万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳動物の卵子は卵胞と呼ばれる小組織内で発育し、発生可能な卵子へと成熟する。本研究では卵子の成熟を促す卵胞の体外培養系を構築するうえで、卵胞構造を維持した成長には卵胞の周囲に存在する髄質細胞の存在とそれらの分泌因子の両者が必要であるとの結論に至り、それらを解決するために新たな培養法を開発するうえで２点の研究シーズを得た。①間質細胞との共培養をを可能とするため卵巣機関培養の開発を開始した②間質細胞を解析したところ、生殖細胞のような挙動を示す道の細胞を見出した。これらの結果から昨年度は以下の研究成果が得られている①当初開発を行う予定であった卵胞培養では、二次卵胞以降の卵胞において顆粒膜細胞が異常増殖を行い、卵胞内の卵子が物理的に圧迫され、細胞死を起こす現象が認めれらた。そこでそれらを解決するために体内を模倣する系を樹立するため卵巣の培養法を考案した。培養液を血管を介してかん流することから、血管が比較的大きいウサギを用いて試験を行った。これまでにかん流培養をお粉装置の開発を完了し、卵巣周囲を覆う溶媒、培養液の開発を行っており、２４時間の培養と卵巣培養における排卵誘発を目指して試験を行っている。②これまで成体卵巣内に存在する生殖細胞は卵子のみであるとされてきた。しかし、近年Tillyらの研究グループが卵巣表皮に卵子以外の生殖細胞が存在すると主張している。我々は、卵巣の中心部に位置する間質細胞を解析するうえで、生殖細胞としてふるまう未知の細胞を同定することに成功した。これらの細胞は、サイトカインを添加した培養液中でDAZL陽性細胞へと分化し、生殖細胞特異的な表面高原マーカーであるCD61とSSEA1の発現が認められている。しかし、再構成卵巣を作出する手法を用いても卵子形成能は認められなかったことから、作出した細胞と真の生殖細胞の違いを遺伝子網羅解析によって解析しその差を比較している。

哺乳动物卵在称为卵泡的小组织中发育，并成熟成能够发育的卵。在这项研究中，我们得出的结论是，为了构建促进卵成熟的卵泡体外培养系统，我们既需要在卵泡周围存在髓质细胞及其生长的分泌因素，从而维持卵泡结构，并且我们获得了两个研究种子，以开发新的培养方法来解决这些问题。 1）卵巢机构培养物的发展开始与基质细胞共同培养2）分析基质细胞时，发现具有类似生殖细胞的途径的细胞。这些结果表明了去年的以下研究结果：1）在最初计划开发的卵泡培养物中，观察到颗粒细胞在继发卵泡后在卵泡中异常增殖，从而导致卵泡内卵的物理压缩，从而导致细胞死亡。为了解决这个问题，我们设计了一种培养卵巢以建立模仿身体的系统的方法。由于培养基是通过血管灌注，因此使用具有相对较大的血管的兔子进行了测试。该公司已经完成了灌注培养粉末装置的开发，并开发了一种覆盖卵巢的溶剂和培养基，目前正在进行测试，目的是在培养和卵巢培养的24小时内诱导排卵。 ②到目前为止，已经说成年卵巢中唯一的生殖细胞是卵。但是，近年来，Tilly等人的研究小组。曾认为卵巢表皮中有非核细胞生殖细胞。我们已经成功地鉴定出在分析位于卵巢中心的基质细胞中充当生殖细胞的未知细胞。这些细胞在补充细胞因子的培养基中分化为DAZL阳性细胞，并且已经观察到生殖细胞特异性表面高原标记CD61和SSEA1的表达。但是，即使使用一种技术来产生重构的卵巢，也未观察到卵母细胞的能力，因此通过基因覆盖率分析分析了产生的细胞和真实生殖细胞之间的差异，并比较了差异。