ブタ卵胞発達, 排卵機構の分子生物学的解析による新規体外成熟培養法の開発

基于猪卵泡发育和排卵机制分子生物学分析开发新型体​​外成熟培养方法

• 批准号: 09J04118
• 负责人: 川島 一公
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J04118/
• 关键词: 卵; 卵丘細胞; 顆粒層細胞; 体外成熟培養; Nuregulin1; マウス体内モデル; ブタ体内モデル; Calpain; 卵子成熟; 卵巣; 拡散; Nuregulinl; 膨潤; 卵丘細胞卵子複合体; Nuregulin 1; 卵胞発達; マイクロアレイ; 卵; 卵丘細胞; 顆粒層細胞; 体外成熟培養; Nuregulin1; マウス体内モデル; ブタ体内モデル; Calpain; 卵子成熟; 卵巣; 拡散; Nuregulinl; 膨潤; 卵丘細胞卵子複合体; Nuregulin 1; 卵胞発達; マイクロアレイ

申請者は,ブタ体内の卵子成熟機構である卵胞発達と排卵機構を理解するために,マーカー遺伝子の絞り込みとして,マウスを用いて研究を行ってきた.前年度までに,排卵過程で,ブタ,マウス共にEGF like factorが卵の成熟機構に大きく寄与すること,また既知のEGF like factor以外に新たに新規のEGF like factorであるNeuregulin1(NRG1)が発現していることを見出した.そのため,本年度は,(1)遺伝子改変が容易なマウスを用いて,卵巣特異的ノックアウトマウスを作成し,その形質を検討した.さらに,(2)排卵過程でEGF like actorが誘起する卵成熟の新たな生理機構を明らかにすることに成功した.(1)卵成熟を誘起する卵丘細胞,顆粒層細胞特異的にNRG1をノックアウトするNRG1flox/flox Cyp19-Creマウスを作製した.この雌マウスは,産子数が有意に減少し,早期閉経を呈することが明らかになりつつある.現在は引き続き雌マウスのフェノタイプを詳細に調べている.(2)これまで,LH刺激後に誘起されるEGF like factorが誘起する卵丘細胞卵複合体が卵胞内に遊離する現象である卵丘細胞卵複合体の膨潤のメカニズムを初めて明らかにした.この一連の現象は,ガン細胞で認められるEGF like factor刺激が誘起するCalpain活性による細胞遊走が原因であった.これらは,マウス,ブタ両者でCalpainが認められ,哺乳動物共通の機構であることも見出している.さらにタイムラプスを用いた研究によって,これらの細胞が拡散モデルと酷似したパターンで広がっていること,In silicoによる再現実験でも卵丘細胞の膨潤にみられる形態が観察できた.現在これらを論文にまとめ,投稿中である.

申请人一直在使用小鼠进行研究，以缩小标记基因的缩小，以了解卵泡发育和排卵机制，这是猪体内鸡蛋成熟的机制。在上一年，发现EGF类似因子在排卵过程中尤其有助于猪和小鼠的卵成熟，而除了已知的EGF类似因子外，除了表达了新的EGF类似因子的Neuregulin1（NRG1）（NRG1）。因此，今年使用易于修饰的小鼠创建了卵巢特异性的敲除小鼠，并检查了它们的特征。此外，（2）在排卵过程中喜欢EGF。我们成功地揭示了一种新的生理机制，即卵子诱导的卵成熟。 （1）我们创建了NRG1FLOX/FLOX CYP19-CRE小鼠，该小鼠特异性地击倒了诱导OVA成熟的NRG1层细胞和颗粒层细胞。很明显，雌性小鼠的出生数量大大减少，并揭示了更年期。我们目前正在继续详细研究雌性小鼠的表型。 （2）迄今为止，我们已经揭示了积云细胞卵复合物肿胀的机制，这是卵泡中诱导的EGF样因子诱导的EGF样因子诱导的库卢斯细胞卵复合物的现象，这是EGF类似因子诱导的库鲁斯细胞卵复合物释放到卵泡中的现象。这一系列现象是在癌细胞中发现的类似EGF的物质。原因是由因子刺激引起的钙蛋白酶活性引起的细胞迁移。在小鼠和猪中都观察到了钙蛋白酶，也发现它是哺乳动物的常见机制。此外，使用延时的研究表明，这些细胞以与扩散模型非常相似的模式扩散，并且在在使用硅中使用的重现实验中观察到了积云细胞的形态。这些目前正在汇编中，目前正在提交。