ビタミンDによる免疫老化におけるエピジェネティック制御機構

维生素D诱导免疫衰老的表观遗传调控机制

基本信息

批准号：
22K11745
负责人：
森真弓
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K11745/
关键词：
ビタミンD 免疫老化 DNAメチル化免疫老化エピジェネティクス

项目摘要

本研究の目的は、「T細胞の免疫老化において、ビタミンDによるDNAメチル化・脱メチル化を介したエピジェネティック制御機構を解明すること」である。まずはビタミンDによるT細胞の老化への影響を確認するため、OT-I TCRをCD8T細胞に発現するトランスジェニックマウスからそのCD8T細胞を単離して、特異抗原やサイトカインを含む培地で培養し、活性化中にビタミンDを加えて老化マーカーや老化に関わる遺伝子発現を、それぞれフローサイトメトリーやQPCRによって調べた。その結果、たしかに老化マーカーの表面発現や、細胞周期調節因子などの遺伝子発現プロファイルがビタミンDを加えることで変化することが確認された。一方、本研究の着想時に注目した文献では、ラットの自己免疫疾患モデルにおいてビタミンDがmiRNAのプロモーター領域でDNA脱メチル化を介してその発現を増加させ、下流のサイトカイン遺伝子などの発現を抑制するとのことであった。しかしながら、本研究の実験で用いたOT-I CD8T細胞においてはmiRNAやサイトカインの発現は同様には見られなかった。これは、文献中で用いられたラットCD4T細胞と、本実験で用いたOT-IトランスジェニックマウスCD8T細胞の差異であると考えられる。以上から、その後の実験計画を根本的に考え直し、本研究でビタミンDによる免疫老化への影響が確認されているOT-I CD8T細胞へ引き続き着目して、この細胞からDNAを単離し、全ゲノムのメチル化シーケンシング解析を行うことにした。現在、シーケンシング自体は完了しており、一次解析とクオリティチェックを遂行中である。

这项研究的目的是通过T细胞通过DNA甲基化和去除维生素D的免疫化来阐明表观遗传控制机制。”首先，为了确认维生素D对T细胞衰老的影响，从CD8T细胞中表达的转基因小鼠分离出来，在含有特定的抗原或细胞因子的培养基中培养它。与Float Metery和QPCR相关的衰老标记和基因表达。结果，已经证实，衰老标记物的表面表达和遗传表达谱（例如细胞周期调节因子）通过添加维生素D来改变。另一方面，根据重点关注这项研究思想的文献，在大鼠的自身免疫性疾病模型中，维生素D通过在miRNA启动子区域中的DNA去除来增加其表达，并抑制下游细胞因子基因的表达那是。但是，在该研究实验中使用的OT-I CD8T细胞中，没有看到miRNA和细胞因子的表达。这被认为是文献中使用的大鼠CD4T细胞与本实验中使用的OT-I转基因小鼠CD8T细胞之间的差异。从上面，随后的实验计划从根本上进行了重新融合，这项研究继续集中在OT-I CD8T细胞上，已确认这些细胞对免疫老化具有维生素D的作用。目前，测序本身已经完成，并且正在实施主要分析和质量检查。