Reconstitution of implantation process with primate endometrial organoid

灵长类子宫内膜类器官重建植入过程

基本信息

批准号：
22K19247
负责人：
依馬正次
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19247/
关键词：
着床霊長類カニクイザル子宮

项目摘要

研究項目1：カニクイザル子宮内膜オルガノイドを用いた人工着床系の構築これまでに我々は、ヒト子宮内膜生検サンプルからオルガノイドを作製することに成功し、エストラジオール、プロゲステロンなどのホルモン添加によって内膜が肥厚することを確認した。さらに、分泌期の子宮内膜に遺伝子レベルで類似しているかどうか、RNA-seq解析を実施し、遺伝子発現の類似性を評価した。また、カニクイザル子宮からオルガノイドの樹立を行い、ヒトと同条件で作製できることを確認した。ラミニン抗体染色などにより、基底膜の存在などを含めて確認した。分泌期のカニクイザル子宮内膜細胞に類似した状態に分化するかどうか、RNA-seq解析により遺伝子発現比較を実施した。研究項目２：着床初期の接着・浸潤過程に寄与する分子機構を解明するヒト着床に関わる候補遺伝子群は、胚性因子・子宮因子・免疫因子を含めると数百以上知られているものの、ヒト生体レベルでの機能的実証はされていない。そこで本研究項目では、それらの候補遺伝子のうち、（１）胚側の遺伝子、（２）接着・浸潤に関わる膜タンパク質をコードする候補遺伝子についてsgRNAを設計し、Cas9タンパク質とともに受精卵に導入することでノックアウト胚盤胞を作出する予定である。今年度は、候補遺伝子の選出のところまで行った。

研究项目1：利用食蟹猴子宫内膜类器官构建人工植入系统迄今为止，我们已经成功地从人类子宫内膜活检样本中创建了类器官，并且我们已经证明，通过添加雌二醇和黄体酮等激素，我们已经成功地从人类子宫内膜活检样本中创建了类器官。人类子宫内膜活检样本证实膜增厚。此外，我们还进行了RNA-seq分析，从基因水平评估子宫内膜与分泌期子宫内膜是否相似，并评估基因表达的相似性。他们还从食蟹猴的子宫中建立了类器官，并证实它们可以在与人类相同的条件下生产。通过层粘连蛋白抗体染色证实基底膜的存在。使用RNA-seq分析进行基因表达比较，以确定这些细胞是否分化成类似于分泌期食蟹猴子宫内膜细胞的状态。研究项目2：阐明在着床早期促进粘附和侵袭过程的分子机制。参与人体着床的候选基因有数百个，包括胚胎因素、子宫因素和免疫因素，但其功能却各有不同。尚未在人类生物学水平上得到证实。因此，在这个研究项目中，我们将设计编码（1）胚胎基因和（2）参与粘附和侵袭的膜蛋白的候选基因的sgRNA，并将它们与Cas9蛋白一起引入受精卵中，我们计划通过敲除囊胚来创建。做这个。今年，我们甚至选择了候选基因。