カルシウムーミリストスイッチ機構の原子の原子レベルでの解明

在原子水平上阐明钙-肉豆蔻开关机制

基本信息

  • 批准号:
    09680644
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.18万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1997
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1997 至 1998
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

リカバリンのN末端は脂肪酸(主にミリストイル酸)で修飾されており、この疎水性部分を利用してカルシウム依存的に細胞膜と相互作用する(カルシウム ーミリストイルスイッチ)。本研究では、リカバリンファミリーに属する蛋白質の詳細なNMR構造解析を行い、このスイッチ機構を原子レベルで理解することを目的とする。1)カルシウム非存在下のリカバリンの構造解析カルシウム非結合状態のリカバリンに関して、βメチレンとメチルのステレオ特異的な帰属を行い、NOESYスベクトルの再解析を行った。この結果、新たに532個の距離情報が得られ、カルシウム非存在下のリカバリンの三次元構造を精密化することに成功した。これにより、疎水性ポケット中のミリストイル基の形状とその周囲の疎水性残基の配置などを明らかにした。2)カルシウム存在下のリカバリンの構造解析カルシウムを結合したリカバリンの各種異種核多次元NMRスペクトルを測定し、常法にしたがつて主鎖及び側鎖のシグナルをほぼ完全に帰属した。次に、この帰属を基にしてNMRスペクトルを解析し、併せて2,438個の距離情報と二面角情報を得た。これらを用いて三次元構造を決定し、ミリストイル基が、カルシウムの結合と運動して蛋白質表面に飛び出すことを明らかにした。また、N末端ドメインの表面に疎水性クレバスが形成されることもわかった。3)カルシウム非存在下のニューロカルシンの構造解析カルシウム非存在下で、ニューロカルシンの各種異種核多次元NMRスペクトルを測定した。現在、約95%の主鎖及び約70%の側鎖の帰属が終了している。帰属された主鎖の^1H、^<13>C、^<15>Nの化学シフトとNOEデータから、二次構造が11本のαヘリックスと4本の短いβストランドから構成されていること、更にこの4本のβストランドが2組の逆平行型βシートを形成していることを明らかにした。
恢复的n末端用脂肪酸(主要是毫米酸)修饰,它使用该疏水部分与细胞膜相互作用(钙-Miristill开关)。在这项研究中,目的是对属于恢复家族的蛋白质进行详细的NMR结构分析,并在原子水平上了解此开关机制。 1)非cal钙的恢复的结构分析是β-甲基和甲基的独特属性,在非结合状态下是立体声特异性的恢复,并重新分析了不良的噪声。结果,新获得了532个距离信息,并在钙下的三维恢复结构中获得了成功。结果,阐明了疏水口袋中米尔斯蒂尔基团的形状以及周围疏水残基的排列。 2)钙的恢复恢复结构分析的存在,结合了钙,测量各种恢复多维NMR光谱测量值,主链和侧链的信号几乎完全属于正常方法。接下来,基于此归属分析了NMR频谱,并获得了2,438个距离信息和两个角信息。使用这些,确定了三维结构,并揭示了Millistille组跳入钙键并锻炼到蛋白质表面。还发现Hyrophobus是在N末端结构域的表面上形成的。 3)神经加洛素在不存在神经加洛素的非钙钙蛋白下的结构分析已经测量了神经钙素的各种异质多维NMR光谱。目前,大约95%的主要链和约70%的侧链已经结束。从属于主链的主链的化学移位和NOE数据中,二级结构由11个α螺旋和四个短β石组成。链形成两组反向平面β板。

项目成果

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科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Toshiyuki Tanaka: "Differential Isotope Labeling Strategy for Determining the Structure of Myristoylated Recoverin by NMR Spectroscopy" J.Biomol.NMR. 11. 135-152 (1998)
Toshiyuki Tanaka:“通过 NMR 光谱测定肉豆蔻酰化恢复素结构的差异同位素标记策略”J.Biomol.NMR。
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  • 发表时间:
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    0
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