Arbuscular菌根菌共糸における共生特異的リン酸代謝に関する研究

丛枝菌根真菌共生特异性磷酸盐代谢研究

• 批准号: 08760057
• 负责人: 江澤 辰広
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760057/
• 关键词: Arbuscular菌根菌; 共生微生物; ホスファターゼ; 基質特異性

Arbuscular菌根共生系における菌根菌から宿主植物へのリン酸移行のメカニズムを解明する目的で、共生特異的に発現する酸性およびアルカリ性ホスファターゼの性質について検討を行った。1.共生特異的酸性ホスファターゼ(infection-specific acid phosphatase ; ISPase)(1)N末端アミノ酸配列の決定:精製された酵素標品よりN末端アミノ酸配列15残基を決定した。さらに、この配列を基にタンパク質データベース上で相同なものを検討したところ、他の植物の酸性ホスファターゼのN末端配列と相同性が高かった。このことはISPaseが宿主植物由来であることを強く示唆していた。(2)活性発現部位の推定:菌根における酸性ホスファターゼ活性部位を組織化学的方法により調べたところ、主に菌根菌組織の周辺部や植物根の細胞壁部分で高い活性が認められたことから、ISPaseは分泌型の酵素であることが予想された。また、ISPaseが根の分泌液中から検出されたことも仮説を支持していた。2.アルカリ性ホスファターゼ(1)粗酵素液調製法:共生状態の菌根菌組織に特異的に発現するアルカリ性ホスファターゼの機能を推定するために、宿主根をセルラーゼなどで消化後、菌根菌組織を顕微鏡下で摘出し、そこから得られる可溶性および不溶性画分におけるホスファターゼ活性を測定する方法を確立した。(2)特異的阻害剤と基質特異性:本酵素の活性はベリリウムにより特異的に阻害された。また、このことを利用して基質特異性や動力学定数などを求めたところ、糖リン酸に対する基質特異性が高いことが明らかになった。

为了澄清磷酸盐从菌根真菌转移到羊膜菌根共生系统中的植物，我们研究了以共生方式特别表达的酸性和碱性磷酸酶的特性。 1。感染特异性酸性磷酸酶（ISPase）（1）测定N末端氨基酸序列：通过纯化的酶制剂确定N末端氨基酸序列的15个残基。此外，当基于该序列在蛋白质数据库上检查同源结果时，发现它与其他植物中酸磷酸酶的N末端序列高度同源。这强烈建议ISPase源自宿主植物。 （2）预测活性表达的位点：当通过组织化学方法检查酸性磷酸酶的活性位点被检查时，可以预测ISPase是一种分泌酶，因为发现它主要活跃于菌根菌群的外围，并在菌根菌群中的菌根和植物壁细胞壁中。它还支持了在根部分泌中检测到的ISPase的假设。 2。碱性磷酸酶（1）粗酶液体制备方法：估计在共生菌根真菌组织中特异性表达的碱性磷酸酶的功能，已经建立了一种方法，以用纤维酶或类似的纤维化酶量量量构层构层构层构层构造量构造的宿主来消化宿主，然后提取菌根的构造量，并将其构层构造的构造量构成，并将其构成层次的构造量，并将其构成层次的构造量，并将其构成层层构造的构造量，并提取从那里获得的不溶性部分。 （2）特异性抑制剂和底物特异性：铍特异性抑制了该酶的活性。此外，当使用此计算底物的特异性和动力学常数时，揭示了糖磷酸糖的底物特异性很高。