アクティベーション・タギングを用いたアブシジン酸についてのシグナル伝達系の解析

使用激活标记分析脱落酸信号转导系统

• 批准号: 08760113
• 负责人: 鈴木 義人
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760113/
• 关键词: アブシジン酸; アクティベーションタギング; タバコ; シグナル伝達系

本研究は、activation taggingによりアブシジン酸(ABA)のシグナル伝達系の解析を行うことを目的としている。対象としたABAの作用はタバコのプロトプラストの分裂阻害能であり、ABAによる阻害を受けずに分裂する変異株の選抜を目指した。以下、得られた成果を示す。1.タバコ葉肉細胞のプロトプラストを、調製後一週間目から段階的な濃度のABA存在下で培養したところ、0.3μMから生長阻害が認められ、30μMでほぼ完全に分裂が抑えられた。ABAを与える時期を遅らせると阻害効果が低下することが判明した。得られた結果より、ABA耐性変異株選抜用のABA濃度を100μMに決定した。2.調製後四日目のプロトプラスト(約40,000,000個)を、activation tagging用ヴェクター(pPCVICEn4HPT)を持つアグロバクテリウムと共存培養することにより形質転換後、ABAによる選抜を行った。アガロースに包埋後、約10日でABAを入れないコントロール区では無数のカルスが形成されたのに対し、ABA存在下で2クローンのABA耐性カルスが得られた。得られたカルスは、再分化が容易ではなく、最近になってようやく再分化体が得られつつある。十分な量の葉が得られるのを待ってプロトプラストのABA耐性能の確認を行い、またT-DNA近傍の遺伝子の回収などを行っていく予定である。

本研究的目的是通过激活标记分析脱落酸（ABA）信号转导系统。 ABA 的靶向作用是其抑制烟草原生质体分裂的能力，我们的目的是选择分裂不受 ABA 抑制的突变株。所得结果如下所示。 1.当烟草叶肉细胞原生质体从制备后1周开始在梯度浓度的ABA存在下培养时，在0.3μM时观察到生长抑制，在30μM时几乎完全抑制分裂。结果发现，延迟 ABA 给药时间会降低抑制效果。基于所获得的结果，用于选择ABA抗性突变体的ABA浓度被确定为100μM。 2.制备四天后的原生质体（约40,000,000个细胞）通过与携带激活标签载体（pPCVICEn4HPT）的农杆菌共培养进行转化，随后使用ABA进行选择。包埋在琼脂糖中大约10天后，在没有ABA的对照区中形成了无数的愈伤组织，而在存在ABA的情况下获得了两个抗ABA愈伤组织的克隆。获得的愈伤组织不易再分化，再分化体也是最近才获得的。我们计划等到获得足够数量的叶子来确认原生质体的 ABA 耐受性，并恢复 T-DNA 附近的基因。