トランスポゾンを用いたアクティベーションタギング系の開発と応用

转座子激活标记系统的开发及应用

• 批准号: 09760113
• 负责人: 鈴木 義人
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760113/
• 关键词: アクティベーションタギング; トランスポゾン; シロイヌナズナ; タバコ

本研究においては、シロイヌナズナの個体レベルでの変異形質の選抜を可能にする新規activationtagging(AT)系を確立し、植物ホルモンのシグナル伝達系の解析に応用することを目的としている。昨年度作成した数種のトランスポゾン型のAT用タギングエレメントのシロイヌナズナにおける転位様式をPCR,サザンブロッティングにより解析した.タバコの場合と異なりシロイヌナズナでは転位の指標となるスペクチノマイシン耐性遺伝子が正常に機能せず、また,ゲノム解析ではsomaticとgerminal転位の区別が明瞭でないため,germinal転位率を算出する事が出来なかった。転位によって生じるemptydonorsiteの検出率が高かったREH-Cと名付けたタグエレメントをその後の研究に使用することに決定し,本エレメントを導入した約2000の形質転換体及びその後代種子を調製した.これらのトランスポゾンの転位により新たな変異を含んでいると考えられる後代種子およびストックセンターより入手可能なT-DNA ATラインを対象に胚軸伸長に関わる変異体のスクリーニングを行った.その結果,通常の栽培条件下で野生型より長い胚軸を有する変異体が1種得られた.形質転換マーカーや形質の遺伝学的解析により,この変異は劣性であり,挿入されたT-DNAによる可能性が高いことが示された.プラスミドレスキューによりT-DNA近傍にゲノムDNAを回収し,シーケンス解析をしたところ,2個以上のT-DNAが複雑な挿入様式で導入されていることが判明した.また,これまでに配列が決定された約600bpの領域には既知の配列との相同性が認められなかった.優性の変異体を得るべく,さらに種々のスクリーニングを継続している.

在本研究中，我们的目标是建立一种新型激活标签（AT）系统，该系统能够在拟南芥个体水平上选择突变性状，并将其应用于植物激素信号转导系统的分析。我们通过PCR和Southern blotting分析了去年在拟南芥中创建的几个转座子型AT标签元件的转座模式。与烟草不同，作为转座指标的壮观霉素抗性基因在拟南芥中不能正常发挥作用。体细胞重排和生发重排之间的区别在基因组分析中尚不清楚，因此无法计算生发重排率。我们决定在后续研究中使用名为REH-C的标签元件，该标签元件对转座产生的空供体位点具有高检出率，并制备了约2000个转化子及其子代种子，其中引入了来自子代的T-DNA。种子和库存中心被认为含有由于转座子转座而产生的新突变。我们筛选了参与下胚轴伸长的突变体，结果，我们获得了一种在正常培养条件下比野生型具有更长下胚轴的突变体。遗传分析表明，该突变是隐性的，可能是由于插入的 T-DNA 所致。质粒救援- 在DNA附近收集基因组DNA，序列分析显示，在该区域中没有观察到与已知序列的同源性，以复杂的插入模式引入了两个或多个T-DNA。我们正在继续进行进一步筛选以获得显性突变体。 。