単一運動ニューロンcDNA比較による軸索ガイダンス分子の単離と機能解析

通过比较单个运动神经元 cDNA 的轴突引导分子的分离和功能分析

基本信息

批准号：
09878182
负责人：
調恒明
金额：
$ 1.09万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878182/
关键词：
運動ニューロン神経回路形成サブトラクション

项目摘要

運動ニューロンの軸索ガイダンスに関わるcDNAを単離することを目的として、サブトラクションクローニングを行い、これまでに以下の結果を得た。1. 方法ニワトリ4.5日胚から、胸部、および腰部脊髄を別々に単離し、パンニング法により運動ニューロンを精製し、ここからmRNAを調製した。cDNAに変換した後、制限酵素処理し、両端にリンカーをつけ、このリンカーを用いてPCR法により増幅した。腰部運動ニューロンcDNAから、胸部運動ニューロンcDNAをビオチンアビジン法を用いて差し引き、さらにこの一部をシークエンスゲル上にdisplayし、特異的発現を示す断片を単離した。これをベクターに繋ぎ、塩基配列を決定しデータベースを照合して、配列の相同性を調べた。2. 結果1つはごく最近クローニングされたショウジョウバエRoundabout(Robo)遺伝子のニワトリホモログであることが判明した。Roboは、神経軸索先端の成長円錐に特異的に発現し、正中線を越えるプロセスを制御している新たな受容体分子として、University of Ca1iforniaのCorey GoodmanらによりCellに報告された。Roboのin situ hybridizationを行い、運動ニューロン、体節に発現していることを明らかにした。この分子のニワトリ運動ニューロンにおける機能を明らかにしたいと考えている。またその他の分子については現在、探索を続けている。

进行减法克隆以分离涉及运动神经元轴突引导的cDNA，到目前为止已获得以下结果。 1。方法：从鸡胚胎4.5天，分别分离胸腔和腰椎，并通过平移方法纯化运动神经元，并从中制备mRNA。转换为cDNA后，用限制酶处理混合物，并将连接器连接到两端，并使用此接头通过PCR进行扩增。使用Biotinavidin方法从腰运动神经元cDNA中减去胸部运动神经元cDNA，其中一部分显示在测序凝胶上，以分离显示特定表达的片段。这是连接到向量的，确定基本序列，并检查数据库以确定序列同源性。 2。结果表明，一个是最近被克隆的果蝇回旋（Robo）基因的鸡同源物。 Corey Goodman等人向Cell报告了Robo。 Ca1fornia大学是一种新型的受体分子，该分子在神经轴突尖端的生长锥中特别表达，并调节整个中线过程。 Robo是原位杂交进行的，并揭示了它是在运动神经元和SOM段中表达的。我们想阐明该分子在鸡运动神经元中的功能。我们目前正在继续寻找其他分子。