運動ニューロン分化にともなう遺伝子発現解析

与运动神经元分化相关的基因表达分析

基本信息

批准号：
08271232
负责人：
調恒明
金额：
$ 1.28万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

4Eのニワトリ胚脊髄から、運動ニューロン特異抗体SC1を用いたpanning法により頸部、胸部、および腰部運動ニューロンを精製し、得られたRNAについてdifferential display法を行い、腰部運動ニューロンに発現し胸部運動ニューロンには発現していないcDNA(_X37)を同定した。in situ hybridization法により、_X37の発現を検討しところ、軸索伸長期である4E, 6Eでは四肢を支配する運動ニューロン(Lateral motor column, LMC)全体に見られるが、体幹を支配する運動ニューロン(Medial motor column, MMC)には全く発現していなかった。シナプス形成の終わったE10ではLMCの一部に限局し、それ以降での発現は見られなかった。また運動ニューロン以外の組織における発現は検出されなかった。これらの結果からこの分子は、四肢の運動ニューロンが特異的に標的筋肉を支配する過程にかかわると考えられる。_X37には2種のcDNAがあり、それぞれ分子量約8万の膜貫通型の分子(Long form, L型)と、L型の構造のうちアミノ末端側の220残基を欠くShort from, S型の2つのisoformをコードすると考えられる。L型は、その構造から接着因子であると考えられるがS型はこれまで報告がない。我々は、S型が、L型の持つ接着能をドミナントネガティブに阻害する事によってその機能を発揮すると予想し、これを証明するため現在細胞レベルでの実験を行っている。この様な接着活性の制御機構はこれまで報告が無く、今回単離された分子の機能は接着活性の調節機構に新たな概念をもたらすと期待される。今後、細胞レベルでの実験に加えて、ターゲットマウスの作製による生体内での機能解明を目指したいと考えている。

通过使用运动神经元特异性抗体SC1固定纯化颈部，胸腔和腰运动神经元的鸡胚胎的脊髓，在获得的RNA上进行了差异显示，并在腰部运动神经元中表达的cDNA（_x37）在腹部运动神经元中表达，并未识别出胸腔运动神经元。通过原位杂交方法检查了_x37的表达，尽管在所有运动神经元（LMC）中发现了该肢体在4E和6E中的肢体（长期轴突延伸），但在控制躯干的运动神经元（MMC）中根本没有表达。在E10，突触形成后，将患者定位于LMC的一部分，并且未观察到随后的表达。此外，检测到运动神经元以外的组织中未表达。这些结果表明，该分子参与了四肢运动中运动神经元特别控制靶肌的过程。 X37具有两种类型的cDNA，被认为编码两种同工型，一种跨膜型分子，分子量约为80,000（l形式）和两个L型结构的同工型，而L型结构短，Shart shat shat and S短，在氨基终端侧缺乏220个残基。由于其结构，L型被认为是粘附因子，但迄今尚未报告S型。我们预测，S类型将通过负面抑制L类型的粘附能力来证明其功能，并且目前正在细胞水平进行实验以证明这一点。没有关于控制粘附活性的这种机制的报告，预计这次分离的分子的功能将在控制粘附活性的机制中引起新的概念。将来，除了在细胞级别进行实验外，我们还希望通过创建靶小鼠在体内阐明该功能。