歯根膜細胞スフェロイドの幹細胞性・骨分化能亢進のメカニズム解明

阐明增强牙周膜细胞球体干性和成骨分化潜力的机制

基本信息

批准号：
22K09970
负责人：
臼井通彦
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09970/
关键词：
スフェロイド歯根膜幹細胞歯根膜細胞骨分化幹細胞性

项目摘要

歯根膜幹細胞をスフェロイド培養すると、単層培養に比較して、幹細胞関連因子であるOCT4、NANOGの遺伝子発現、並びに蛋白発現が増強している一方で、スフェロイド培養した歯根膜細胞が単層培養した歯根膜細胞に比較して、形成される石灰化結節量を増加させ、さらに、マウス頭蓋骨欠損モデルに移植すると、新生骨量を増加させる。本研究の目的は、歯根膜幹細胞スフェロイドにおける「幹細胞性の上昇」「骨分化能の上昇」の相反する事象のメカニズムを明らかにすることである。以前、我々は、歯根膜幹細胞スフェロイドに単層培養歯根膜幹細胞に比較して、転写因子であるNR4A2が高く発現していることを明らかにした。歯根膜幹細胞スフェロイドにおけるNR4A2遺伝子のノックダウンアッセイと過剰発現アッセイを行った。NR4A2遺伝子の過剰発現は歯根膜幹細胞スフェロイドにおける幹細胞マーカーであるOCT4、NANOGの遺伝子発現に影響を与えなかった。しかし、NR4A2のsiRNAによるノックダウンではOCT4、NANOGの遺伝子発現を有意に抑制した。すなわち、NR4A2が歯根幹細胞スフェロイドに幹細胞性の維持に関わっている可能性が示唆された。我々は、今まで歯根膜幹細胞スフェロイド（直径200 um）を作製し、in vitroでの機能解析やin vivoでの移植実験に用いてきた。しかし、サイズの大きいものを用いた方が、より効率よくRNA抽出を行うことができる。そこで、より大きな歯根膜幹細胞スフェロイドを作製できるチップの作製を行った。

When periodontal ligament stem cells are cultured in spheroids, gene expression and protein expression of the stem cell-related factors OCT4 and NANOG are enhanced compared to monolayer cultures, while periodontal ligament cells cultured in spheroids increase the amount of calcified nodule formed compared to periodontal ligament cells cultured in monolayer cultures, and furthermore, when implanted in a mouse skull defect model, new bone mass增加。这项研究的目的是阐明牙周韧带干细胞骨骼中发生冲突事件的机制，例如“增加干细胞特性”和“增加骨分化能力”。以前，我们已经透露，与单层培养的牙周韧带干细胞相比，转录因子NR4A2在牙周韧带干细胞球体中高度表达。进行了牙周韧带干细胞球体中NR4A2基因的敲低和过表达测定。 NR4A2基因的过表达对牙周韧带干细胞球体中Oct4，Nanog，干细胞标记的基因表达没有影响。然而，用siRNA敲除NR4A2可显着抑制Oct4和Nanog的基因表达。换句话说，有人提出NR4A2可能参与了根干细胞球体中干细胞特性的维持。我们以前已经产生了牙周韧带干细胞球体（直径200 UM），并将其用于体外和体内植入实验的功能分析。但是，使用较大的尺寸使得可以更有效地进行RNA提取。因此，制备了能够产生较大牙周韧带干细胞球体的芯片。

项目成果

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Psychosocial Stress Induces Orofacial Mechanical Allodynia Due to the Enhancement of Transient Receptor Potential Ankyrin 1 Expression in Trigeminal Ganglion Neurons via the Increment of the Trace Amine-Associated Receptor 7f Expression

心理社会压力通过微量胺相关受体 7f 表达的增加，增强三叉神经节神经元中瞬时受体电位锚蛋白 1 的表达，从而诱发口面部机械异常性疼痛

DOI：
10.3390/stresses3010006
发表时间：
2022
期刊：
Stresses
影响因子：
0
作者：
Ito Ko;Shinoda Masamichi;Soma Kumi;Ikutame Daisuke;Ikami Eiji;Mizuno Yosuke;Usui Michihiko;Asoda Seiji;Sato Tsuyoshi
通讯作者：
Sato Tsuyoshi

Contact Co-culture of Osteoblasts and Sympathetic Neuronal Cells Promotes Differentiation of Both Cell Types

成骨细胞和交感神经细胞的接触共培养促进两种细胞类型的分化

DOI：
10.21873/invivo.12871
发表时间：
2022
期刊：
In Vivo
影响因子：
2.3
作者：
OKUBO MASAHIKO;ITO KO;YAMAZAKI FUMIE;MIZUNO YOSUKE;ISOZAKI YUTA;ASODA SEIJI;USUI MICHIHIKO;SATO TSUYOSHI
通讯作者：
SATO TSUYOSHI

Ropinirole inhibits inflammatory cytokine production in gingival epithelial cells and suppresses alveolar bone loss in an experimental rat model of periodontitis.

Ropinirole 在牙周炎实验大鼠模型中抑制牙龈上皮细胞中炎症细胞因子的产生并抑制牙槽骨丢失。

DOI：
10.3892/etm.2022.11777
发表时间：
2022
期刊：
Experimental and Therapeutic Medicine
影响因子：
2.7
作者：
Yuta Isozaki;Tsuyoshi Sato;Rie Takagi;Ko Ito;Michihiko Usui;Masaaki Kawano;Sho Matsushita.
通讯作者：
Sho Matsushita.

PDLIM5は歯肉上皮細胞の増殖と遊走に促進的に作用する

PDLIM5促进牙龈上皮细胞增殖和迁移