メンブレンベジクルを利用した多機能性ワクチンプラットフォームの開発

利用膜囊泡开发多功能疫苗平台

基本信息

批准号：
22K09950
负责人：
瀧澤智美
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、気道粘膜を介して進入してくる様々な病原体に対する防御手段の構築を目的とし、効果的で安全な粘膜ワクチンのプラットフォームについての研究を行う。モデル抗原として呼吸器感染症の起因となる黄色ブドウ球菌が産生分泌するメンブレンベジクルを用い、アジュバント候補としてハイドロキシアパタイトを用い、新規粘膜ワクチンプラットフォームの確立を目指す。本年度ではまず、モデル抗原として用いる黄色ブドウ球菌が分泌するメンブレンベジクを大量に精製するため、精製方法についての検討を行った。黄色ブドウ球菌を小試験管で前培養し、次の日にスケールアップして好気的に培養を行った。細菌は死滅とともにメンブレンベジクルを放出することが知られているため、後期対数増殖期まで培養し培養液の濁度を測定した。しかし、吸光度が期待通り上がらなかった。培養上清を回収し、それを超遠心にかけ沈殿物（ベジクルが含まれる）を回収し、タンパク質定量を行った所、回収されたタンパク質量は少なかった。従って、ベジクルの回収量を増やすため、培地の種類をLB培地とBHI培地で比較し、さらに好気条件下で振とう培養を行った。その結果、LB培地BHI培地とも濁度が増加し、超遠心後に回収された沈殿物のタンパク質量も増加した。LB培地の方がメンブレンベジクルの回収量が高かったため、LB培地で振とう培養することとした。SDS電気泳動により超遠心により回収された沈殿物に含まれるタンパク質について分析したところ、複数種類のバンドが検出された。

在本研究中，我们将研究有效且安全的粘膜疫苗平台，旨在构建防御通过呼吸道粘膜侵入的各种病原体的手段。我们的目标是利用引起呼吸道感染的金黄色葡萄球菌产生和分泌的膜囊泡作为模型抗原，并使用羟基磷灰石作为候选佐剂，建立一个新的粘膜疫苗平台。今年，我们首先研究了纯化方法，以纯化大量金黄色葡萄球菌分泌的膜囊泡，用作模型抗原。金黄色葡萄球菌在小试管中预培养，第二天放大，需氧培养。由于已知细菌在死亡时会释放膜囊泡，因此我们将其培养至对数生长期后期并测量培养液的浊度。然而，吸光度并未如预期增加。收集培养上清液，进行超速离心，收集沉淀物（含有囊泡），进行蛋白定量，收集的蛋白量较少。因此，为了增加回收的囊泡量，我们比较了LB培养基和BHI培养基的培养基类型，并进一步在有氧条件下进行振荡培养。结果，LB培养基和BHI培养基的浊度均增加，超速离心后回收的沉淀中的蛋白量也增加。由于LB培养基中回收的膜囊泡的量较高，因此我们决定在LB培养基中进行振荡培养。当通过SDS电泳分析超速离心收集的沉淀物中含有的蛋白质时，检测到多种类型的条带。