メンブレンベジクルを利用した多機能性ワクチンプラットフォームの開発

利用膜囊泡开发多功能疫苗平台

基本信息

批准号：
22K09950
负责人：
瀧澤智美
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、気道粘膜を介して進入してくる様々な病原体に対する防御手段の構築を目的とし、効果的で安全な粘膜ワクチンのプラットフォームについての研究を行う。モデル抗原として呼吸器感染症の起因となる黄色ブドウ球菌が産生分泌するメンブレンベジクルを用い、アジュバント候補としてハイドロキシアパタイトを用い、新規粘膜ワクチンプラットフォームの確立を目指す。本年度ではまず、モデル抗原として用いる黄色ブドウ球菌が分泌するメンブレンベジクを大量に精製するため、精製方法についての検討を行った。黄色ブドウ球菌を小試験管で前培養し、次の日にスケールアップして好気的に培養を行った。細菌は死滅とともにメンブレンベジクルを放出することが知られているため、後期対数増殖期まで培養し培養液の濁度を測定した。しかし、吸光度が期待通り上がらなかった。培養上清を回収し、それを超遠心にかけ沈殿物（ベジクルが含まれる）を回収し、タンパク質定量を行った所、回収されたタンパク質量は少なかった。従って、ベジクルの回収量を増やすため、培地の種類をLB培地とBHI培地で比較し、さらに好気条件下で振とう培養を行った。その結果、LB培地BHI培地とも濁度が増加し、超遠心後に回収された沈殿物のタンパク質量も増加した。LB培地の方がメンブレンベジクルの回収量が高かったため、LB培地で振とう培養することとした。SDS電気泳動により超遠心により回収された沈殿物に含まれるタンパク質について分析したところ、複数種類のバンドが検出された。

这项研究旨在对通过气道粘膜进入的各种病原体制定保护措施，并将研究有效且安全的粘膜疫苗平台。目的是使用金黄色葡萄球菌生产和分泌的膜囊泡建立新的粘膜疫苗平台，这是呼吸道感染的原因，羟基磷灰石作为候选辅助剂。今年，我们首先研究了纯化方法，以纯化金黄色葡萄球菌分泌的大量膜Vegik，该膜被用作模型抗原。金黄色葡萄球菌在小型测试管中预培养，并在第二天扩大到有氧培养物。由于已知细菌在死亡后释放膜囊泡，因此测量培养物的浊度直到对数晚期生长阶段。但是，吸光度并未如预期的那样改善。收集培养上清液，并收集沉淀物（包括囊泡），并进行蛋白质定量，并且回收的蛋白质量很小。因此，为了增加回收的囊泡的量，比较了LB和BHI培养基之间的培养基类型，并在有氧条件下进行了摇动培养。结果，LB培养基BHI培养基中的浊度增加，超速离心后恢复的沉淀物中的蛋白质也增加了。由于在LB培养基中回收的膜囊泡量较高，因此决定在LB培养基中摇动培养物。当分析通过SDS电泳回收的沉淀物中包含的蛋白质时，检测到了几种类型的条带。