口腔がんにおける免疫環境構築機構の解明

口腔癌免疫环境构建机制的阐明

• 批准号: 22K09926
• 负责人: 毛利 安宏
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09926/
• 关键词: 口腔がん; 免疫; T細胞; 免疫環境; 免疫チェックポイント阻害療法; サイトカイン

これまで口腔がん組織における免疫細胞浸潤はがん組織のbulk RNAシークエンスデータを用いて、single sample gene set enrichment（ssGSEA）解析によって行われてきた。この手法では、既に報告されている各免疫細胞のマーカー遺伝子の発現値を基に浸潤度を計算する。しかし、マーカー遺伝子の選び方によって浸潤度計算の正確さが左右されるため、全ての免疫細胞の浸潤度が正確に計算されるとは限らない。このため、実際の口腔がん組織に浸潤している免疫細胞の遺伝子発現状態を反映する解析を行う必要がある。近年、がん組織の1細胞RNAシークエンスデータを事前情報として与えることによってbulk RNAシークエンスデータを簡便にdeconvolutionし、浸潤している各免疫細胞の割合を正確に算出する手法が報告された。またこの手法では、各免疫細胞の推定の遺伝子発現値も計算可能である。そこで、この手法を用いてTCGAが取得した514症例の口腔がんデータを用いてがん組織に浸潤する免疫細胞の割合を再検討した。その結果、これまでの検討と異なり、T細胞浸潤が患者予後と強く相関することが明らかとなった。このため、臨床応用の面からT細胞浸潤を規定する因子を同定することが重要と考えられ、本研究で用いる実験系を見直す必要があった。T細胞浸潤を詳細に検討するために、現在4NQO発がんモデルを作製している。このモデルは喫煙による発がんと類似しており、TP53遺伝子の変異を高頻度で引き起こす。我々の研究室では口腔がん症例において高頻度に変異を示すFAT1とCDKN2Aの変異マウスを保有しており、野生型に加え、これらのマウスの4NQOモデルも現在作製している。予備実験として4NQOで発生したがん組織に浸潤した免疫細胞をフローサイトメトリーで検討し、様々な免疫細胞が浸潤していることを確認した。

到目前为止，使用来自癌症组织的大量RNA测序数据进行了单个样品基因集富集（SSGSEA）分析，对口腔癌组织中的免疫细胞侵袭进行了。在此技术中，根据每个免疫细胞的标记基因的先前报道的表达值计算侵袭程度。但是，由于入侵计算的准确性取决于选择标记基因的方式，因此并非总是有可能准确地计算所有免疫细胞的浸润水平。因此，有必要进行反映正在渗透实际口腔癌组织的免疫细胞基因表达状态的分析。最近，据报道，通过提供来自癌症组织的单细胞RNA测序数据作为预先信息，并准确计算每个浸润的免疫细胞的比例，可以轻松地对大量RNA测序数据进行解析。该技术还允许计算每个免疫细胞的估计基因表达值。因此，使用此技术，我们使用TCGA获得的514例口腔癌数据重新检查了免疫细胞浸润癌症组织的比例。结果，与以前的研究不同，据表明，T细胞浸润与患者预后密切相关。因此，认为从临床应用的角度来确定定义T细胞浸润的因素很重要，并且有必要审查本研究中使用的实验系统。为了详细检查T细胞侵袭，我们目前正在创建一个4NQO癌变模型。该模型类似于吸烟引起的癌变，在高频下引起TP53基因的突变。我们的实验室携带FAT1和CDKN2A突变小鼠，在口腔癌病例中表现出高突变，除了野生型，我们目前还创建了这些小鼠的4NQO模型。作为一个初步实验，通过流式细胞仪检查了在4NQO中侵入癌症组织的免疫细胞，以确认入侵了各种免疫细胞。