肝細胞癌切除新鮮組織からの細胞分離による腫瘍免疫細胞クロストークの解明

通过从肝细胞癌切除的新鲜组织中分离细胞来阐明肿瘤-免疫细胞串扰

• 批准号: 22K08829
• 负责人: 遊佐 俊彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08829/
• 关键词: 肝細胞癌; 腫瘍微小環境; 腫瘍関連好中球; 腫瘍関連マクロファージ; CD8陽性Tリンパ球; 制御性T細胞; 腫瘍免疫; がん微小環境; 免疫細胞分離; 抗腫瘍免疫

本研究は、肝細胞癌において腫瘍内部および腫瘍周囲の双方で免疫細胞の局在を調べ、臨床病理学的因子との関連性や予後に与える影響について明らかにすることを目的とした。2022年度は組織に浸潤する免疫細胞の評価として、免疫染色を用いた検討を行った。2004年から2013年に当科にて初回肝切除術を施行したHCC患者225例を対象とし、切除検体のパラフィン組織を用いた免疫染色にて免疫細胞の局在・浸潤の程度と患者背景因子や予後との対比を行った。各免疫細胞間の関連性としては、腫瘍辺縁部においてTAN,TAMは相関関係を、TANとCD8+ T細胞は逆相関関係を示した。また、予後についての検討では腫瘍辺縁部のTAN、TAMが多い症例やCD8+ T細胞が少ない症例においては有意に予後不良であった。腫瘍辺縁部における４種の免疫細胞についてRisk- signatureを作成すると、High-risk群はLow-risk群と比較して有意に予後不良であった。上記内容についてはまとめて論文化し、Cancer Science誌にAcceptされた。腫瘍組織からのTANを中心とした免疫細胞分離についてはMACSを用いた分離により免疫細胞の形態学的および機能的な確認と、精製度の向上を目指した。しかし好中球はN1/N2 TANとしての特性に関する報告が少ないこともありマーカーを用いた分離の確立には至らなかった。末梢血からの免疫細胞分離についてはFicollおよびPolymorphprepを添加・遠心することで形態学的評価において純度の高い検体を得ることが可能であった。これらの知見を生かし今後は組織および末梢血中の免疫細胞の分離プロトコールを確立し、得られたサンプルによる網羅的解析を検討したい。

这项研究旨在研究肝细胞癌内外肿瘤内部和周围的免疫细胞的定位，并阐明与临床病理因素及其对预后的影响的关联。在2022财年，使用免疫染色来评估浸润组织的免疫细胞。我们研究了2004年至2013年在我们部门进行初始肝切除术的225例HCC患者，并使用切除标本的石蜡组织比较了患者的背景因素和预后。至于每个免疫细胞之间的关联，棕褐色和TAM在肿瘤边缘之间相关，棕褐色和CD8+ T细胞呈负相关。此外，如果边缘肿瘤处的棕褐色和tam更为常见，而CD8+ T细胞很少的情况下，预后明显更糟。当在肿瘤边缘准备四个免疫细胞的风险签名时，与低风险组相比，高危组的预后明显较差。简而言之都在癌症科学中接受了上述内容。免疫细胞（主要是棕褐色）与肿瘤组织的分离旨在通过使用MAC分离出来的形态和功能确认免疫细胞，并改善纯度水平。但是，由于缺乏关于中性粒细胞的特性为N1/N2 TAN的报告，因此未能实现使用标记物建立分离。为了使免疫细胞与外周血分离，可以通过添加和离心ficoll和polymorphprep在形态学评估中获得高度纯的标本。使用这些发现，我们将建立一种方案，用于在组织和外周血中发出免疫细胞，并使用所获得的样品考虑全面分析。