甲状腺ホルモン生合成調節機構における硫酸化とその機能の解明

阐明硫酸化及其在甲状腺激素生物合成调节机制中的作用

基本信息

批准号：
22K08636
负责人：
吉原彩
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08636/
关键词：
甲状腺サイログロブリン硫酸化

项目摘要

本研究は、Tgの硫酸化が甲状腺ホルモン生合成に及ぼす影響について明らかにし、甲状腺濾胞機能調節機能の全体像を明らかにすることが目的である。初年度である2022年度は、以前行ったラット甲状腺FRTL-5細胞を用いて行ったDNAマイクロアレイの結果の再解析を行い、甲状腺機能遺伝子調節因子であるTSHの添加によって、変動がみられた硫酸化にかかわる遺伝子を抽出した。TSHにより、Sult1a1をはじめ、Sult1d1、Sult5a1、Tpst1、Tpst2、Chest12などの硫酸化に関わる遺伝子に変動がみられた。特に、Sult1a1はTSHによる強い発現抑制がみられた。Sult1a1は甲状腺ホルモンの硫酸化を触媒する主要な酵素である。DNAマイクロアレイの結果をもとに、real-time PCRおよびwestern blottingを用いて、TSHによるSult1a1のmRNAおよびタンパク発現の影響についてFRTL-5細胞を用いて実験を行った。Sult1a1はTSHの濃度依存性、時間依存性に遺伝子およびタンパク発現が抑制されるという結果が得られた。さらに、TSHによるcAMPシグナル経路を介した反応であることを確認するためにforskolinとdbcAMPを用いて実験を行った。FRTL-5細胞をforskolinとdbcAMPにより刺激したところ、濃度依存性および時間依存性にmRNAの発現が強く抑制される結果が得られた。

这项研究旨在阐明TG硫酸化对甲状腺激素生物合成的影响，并阐明甲状腺卵泡功能调节功能的整体情况。在2022年的第一年，我们重新分析了使用先前执行的大鼠甲状腺FRTL-5细胞进行的DNA微阵列的结果，并提取了参与硫酸化的基因，这些基因在添加TSH（添加TSH）的基因调节剂时表现出很大的变化。 TSH显示了涉及硫酸化的基因的变化，包括Sult1a1，Sult1d1，Sult5A1，TPST1，TPST2和Chest12。特别是，sult1a1被TSH强烈抑制。 Sult1a1是催化甲状腺激素硫酸化的主要酶。根据DNA微阵列的结果，使用实时PCR和Western印迹进行了实验，以使用FRTL-5细胞通过TSH影响Sult1A1 mRNA和蛋白质的表达。发现Sult1a1可以以浓度依赖性的方式和时间依赖性TSH抑制基因和蛋白质表达。此外，使用Forskolin和DbCamp进行了实验，以确认该反应是通过TSH通过CAMP信号通路。当Frtl-5细胞用福斯科蛋白和dbCamp刺激时，mRNA表达以浓度依赖性和时间依赖性的方式得到了强烈抑制。