Establishment of new intervention methods for hematopoietic transcriptional control for clinical application.

建立临床应用的造血转录控制新干预方法。

• 批准号: 22K08483
• 负责人: 奥田 司
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08483/
• 关键词: 転写因子; 白血病; リン酸化; Yeast Two-Hybrid; 染色体転座; キナーゼ; 翻訳後修飾; RUNX1; 造血発生; 転写因子; 白血病; リン酸化; Yeast Two-Hybrid; 染色体転座; キナーゼ; 翻訳後修飾; RUNX1; 造血発生

本年度はRUNX1分子のセリン・スレオニン残基のリン酸化について進展があった。公開データベース探索によってラントドメイン内でリン酸化を受けているアミノ酸残基群を複数特定し、これらのアミノ酸残基群を非リン酸化セリンを模倣するアラニンへ置換させた変異体分子や、リン酸化型セリンを模倣するアスパラギン酸へと置換した変異分子を作製し検討した。すると、いずれの変異によっても、RUNX1は転写活性化能を大きく失うことが判明した。RUNX1活性制御の新たな作用点である可能性を検討すべく、現在、詳細の検討を進めている。一方、胎生中期のマウス胎仔由来cDNAライブラリーを用いたYeast Two-HybridスクリーニングによってRUNX1のC末端ドメインと会合するタンパクを特定した。そのうち一つはこれまでRUNX1との関係性が知られていない、あるキナーゼタンパク（ここでは便宜上キナーゼXと記載する）であった。定法に従って構成的活性化変異キナーゼXを作製したところ、野生型RUNX1と共発現させるとRUNX1による標的遺伝子群の転写結成化能を顕著に上昇させることを見出した。現在そのリン酸化の標的となるアミノ酸残基の特定に注力している。上記に加え、補完的アプローチとして、RUNX1の転写標的遺伝子群の探索も行っている。本年度は候補遺伝子法によって2つの免疫関連遺伝子と1つの細胞周期関連遺伝子、そして１つの神経系キナーゼ遺伝子を特定した。また、公開データベースを利用した手法によって造血器腫瘍関連遺伝子を別個に一つ特定した。現在、その詳細をウエットラボベースの解析によって検討している。当該研究では、こうした複数のアプローチによってRUNX1作用への干渉手法の確立へと進めて行きたい。

今年，Runx1分子中丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化进展。我们通过搜索公共数据库来确定了在咆哮域内经历磷酸化的多组氨基酸残基，并创建了突变的分子，其中这些氨基酸残基被模仿非磷酸化的丝氨酸和突变分子的丙氨酸代替，在其中模仿了serpicalsine ser磷酸化的磷酸化磷酸化。然后发现Runx1由于任一突变而显着失去其转录激活能力。我们目前正在进行详细的研究，以研究这可能是RUNX1活动调节的新作用点的可能性。同时，通过使用源自胎儿小鼠的cDNA库来鉴定与Runx1的C末端结构域相关的蛋白质。其中之一是一种激酶蛋白（以便方便起见为了方便起见，称为激酶X）与Runx1的关系直到现在。当根据标准方法制备组成性激活的突变激酶X时，发现与野生型Runx1共表达Runx1通过Runx1形成转录的能力显着提高了Runx1的能力。当前，我们专注于鉴定针对其磷酸化的氨基酸残基。除上述方法外，作为一种互补方法，我们还探索了RUNX1转录靶基因组。今年，使用候选基因方法鉴定了两个与免疫相关的基因，一个与细胞周期相关的基因和一个神经系统激酶基因。此外，使用公共数据库分别鉴定了一个造血肿瘤相关的基因。目前，正在使用基于湿的实验室分析对细节进行检查。在这项研究中，我们想使用多种方法来建立Runx1动作的干扰方法。