腫瘍微小環境におけるRap2の機能解析

Rap2在肿瘤微环境中的功能分析

• 批准号: 22K08386
• 负责人: 武居 公子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08386/
• 关键词: 有棘細胞癌; 腫瘍微小環境; Rap2

マウス有棘細胞癌モデル細胞株(低転移細胞株、親株)および親株からin vivo selectionで樹立された高転移細胞株(娘株)の遺伝子発現をDNAチップで比較し、転移に関係すると思われる幾つかの候補分子を得た。そのうちRap2 (Ras-related protein 2)発現導入細胞株と対照細胞株をマウス皮下に移植したところ、候補遺伝子発現導入細胞株由来腫瘍において浸潤する単球の数が多い傾向があった。更に、浸潤した単球には当該候補分子が発現していることを確認した(F4/80と共染)。腫瘍に浸潤する単球系細胞は腫瘍関連マクロファージ(tumor-associated macrophage TAM)として腫瘍免疫や腫瘍の微小環境形成に重要な役割を果たしていると考えられている。Rap2は有棘細胞癌臨床検体での免疫染色でもTAMに発現陽性を示していた。Rap2はA、B、Cの3つのアイソフォームを持つが、定量RT-PCRの結果、マウス骨髄由来単球をM-CSF (macrophage colony stimulating factor) 刺激で分化したマクロファージで発現増強するのはRap2Bであることがわかった。マクロファージは病原体や寄生虫感染防御に働くM1型と組織修復などにかかわるM2型に大別されるが、腫瘍関連マクロファージはM2型の性質をもち、M-CSFで誘導されることが分かっている。予備実験で、Rap2Bのノックアウト(KO)マウスでは、野生型同胞と比較して皮下に接種した腫瘍の増大速度が遅延した。Rap2A KOマウス、Rap2B KOマウス、Rap2C KOマウス由来骨髄単球をそれぞれマクロファージに分化させてWestern解析したが、Rap2A、Rap2Cの発現増強は認めず、アイソフォーム間の機能補完はないと考えられた。

比较小鼠鳞状细胞癌模型细胞系（低转移细胞系，亲本系）和通过使用DNA芯片体内选择从亲本系建立的高转移细胞系（子系）之间的基因表达，结果为获得了一些被认为与转移有关的候选分子。当将表达 Rap2（Ras 相关蛋白 2）的细胞系和对照细胞系皮下移植到小鼠体内时，在源自候选基因表达细胞系的肿瘤中，浸润单核细胞的数量往往更高。此外，还证实了候选分子在浸润的单核细胞中表达（与F4/80共染色）。浸润肿瘤的单核细胞被认为在肿瘤免疫和肿瘤微环境形成中发挥重要作用，如肿瘤相关巨噬细胞（TAM）。在鳞状细胞癌临床标本的免疫染色中，Rap2 在 TAM 中也呈阳性表达。 Rap2有A、B、C三种异构体，但定量RT-PCR的结果显示，Rap2B是在小鼠骨髓来源的M-CSF（巨噬细胞集落刺激因子）刺激分化的巨噬细胞中表达增强的异构体。事实证明是单核细胞。巨噬细胞大致分为 M1 型，其作用是抵抗病原体和寄生虫感染；M2 型，其参与组织修复，具有 M2 型特性，并且已知由 M-CSF 诱导。在初步实验中，与野生型小鼠相比，Rap2B 敲除 (KO) 小鼠皮下接种的肿瘤生长速度较慢。来自 Rap2A KO 小鼠、Rap2B KO 小鼠和 Rap2C KO 小鼠的骨髓单核细胞分化为巨噬细胞并进行 Western 分析，但没有观察到 Rap2A 或 Rap2C 表达增强，表明亚型之间不存在功能互补。