マクロファージiNOS遺伝子発現制御におけるステロイド抵抗性機序の解析

巨噬细胞iNOS基因表达调控的类固醇抵抗机制分析

• 批准号: 15790589
• 负责人: 武居 公子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790589/
• 关键词: マクロファージ; 局所免疫; ステロイド抵抗性; iNOS; IFN-β

生体防御反応の一つとして、マクロファージはリポ多糖(LPS)等の菌体成分に反応して誘導性一酸化窒素合成酵素(iNOS)を発現し、NOを産生するが、この反応はグルココルチコイドにより抑制される。私共は培養マクロファージにおける細胞密度依存性のステロイド抵抗性を見出し、その機構を解析した。すなわち、低密度又は高密度で培養したマクロファージをLPSで刺激し、リアルタイムPCR法(TaqMan PCR法)でiNOS遺伝子の発現量を測定した。その結果、高密度では低密度と比較してLPSによるiNOS遺伝子の発現が増強していた。また、デキサメサゾン(Dex)存在下でLPS刺激した細胞でのiNOS遺伝子発現抑制効果を測定したところ、高密度では低密度と比較してDex抵抗性が見られた。次に、高密度細胞をLPSで刺激した培養上清、ステロイド抵抗性を付与する候補因子としてインターフェロン-β(IFN-β)を各々未刺激低密度細胞に添加したところ、低密度細胞でも高密度細胞と同様のiNOS遺伝子発現増強とDex抵抗性を示した。さらに、IFN-βの下流分子であるSTAT1は、高密度細胞とIFN-β添加低密度細胞では、いずれも強く活性化されていた。マクロファージがLPSに反応してIFN-bを分泌し、このIFN-βがLPSによるiNOS遺伝子発現にも関与することが報告されている。しかし、IFN-βのステロイド抵抗性への関与は知られていなかった。今回の結果からLPS刺激細胞から分泌されたIFN-βがオートクライン的に作用し、ステロイド抵抗性に関与している可能性が考えられた。侵入した病原体に対する局所の免疫・炎症反応は、hypothalamic-pituitary-adrenal axisを介して血中コルチゾール濃度を上昇させる。これにより全身の過剰反応は予防されるが、局所での病原体排除反応は減弱すると考えられる。一方、今回の解析結果から、局所に高密度に集積したマクロファージがIFN-βによりステロイド抵抗性iNOS発現能を獲得する可能性が示唆された。

作为生物防御反应之一，巨噬细胞代表诱导的一氧化氮合成酶（iNOS），以响应细菌成分（例如Lipo多糖（LPS）），并产生NO，但该反应基于糖皮质激素。我们已经发现了培养巨噬细胞中细胞密度的类固醇耐药性，并分析了该机制。也就是说，通过LPS刺激以低密度或高密度培养的巨噬细胞，并以真实的-Time PCR方法（Taqman PCR方法）测量了iNOS基因的表达。结果，在高密度下，与低密度相比，LPS通过LPS的表达增加了。此外，当在Dex Samezon（DEX）的存在中测量LPS刺激细胞中的Inos基因表达抑制作用时，与低密度相比，高密度的DEX耐药性在高密度中可见。接下来，将干扰素-β（IFN-β）添加到不刺激的低密度细胞中，作为候选因子，即使在低密度细胞中，也会产生由LPS和类固醇耐药性刺激的高密度细胞，即高密度细胞。它显示出与细胞相同的iNOS基因表达和DEX抗性。此外，IFN-β下游分子STAT1都在高密度和β添加的低密度细胞中强烈激活。据报道，巨噬细胞对LPS分泌IFN-B，而这种IFN-β也参与LPS INOS基因表达。但是，IFN-β的类固醇耐药的参与尚不清楚。从此结果，从LPS刺激细胞分泌的IFN-β可能自动在自动脚趾中起作用，并参与类固醇的耐药性。局部免疫和对浸润病原体的炎症反应通过下丘脑 - 垂体 - 肾上腺轴增加了血果醇的浓度。结果，防止了整个身体上的重叠，但局部病原体消除反应可能会减少。另一方面，分析表明，高度密集整合在本地的巨噬细胞可以通过IFN-β获得类固醇抗性的iNOS表达。