The cell identification research of bone marrow drived liver repaired cell in the new liver regeneration therapy

新型肝再生疗法中骨髓驱动的肝修复细胞的细胞鉴定研究

基本信息

批准号：
22K08057
负责人：
山本直樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

iPS細胞由来間葉系幹細胞(iMSC)をGAN食モデルマウスに脾臓投与と静脈投与を行い、投与後の肝組織を浮遊切片法による高感度免疫電顕法とFEI社製の透過型電子顕微鏡Tecnai12BTと走査型電子顕微鏡Qunta3D FEG DualBeamシステムを用いて投与したiMSCの特徴と動態を解析した。また肝組織でのSirius Red染色での肝線維化評価とH-E染色とオイルレッド染色で肝脂肪沈着評価を行った。その結果、脾臓投与の方が肝線維化抑制効果と肝脂肪抑制効果を認めた。また我々が開発した肝脂肪化悪化モデル(AK3KOマウス)とMMP9発現細胞標識トランスジェニック(MMP9/LacZ-DsRed Tg)マウスにGAN特殊飼料食投与することでMAFLDモデルを作成し、肝線維化あるいは脂肪化環境下でこのモデル内部の肝細胞や星細胞等の変化を電子顕微鏡等で評価を開始し、このMAFLDモデルにiMSCを脾臓投与あるいは静脈投与し、線維化・脂肪化抑制効果の評価と動態解析を行った。またiMSCの培養液よりエクソソームを生成し、そのエクソソームをGAN特殊飼料食モデルマウスから連続静脈投与を行い、肝線維化と肝脂肪化の抑制効果を評価した。また新規開発した代謝系異常のAK5KOマウスを作成して、GFPTGからのGFP陽性骨髄細胞あるいはGFP陽性骨髄由来間葉系細胞(MSC)を投与し、肝臓内での投与した細胞の動態と機能解析を行った。

将iPS细胞来源的间充质干细胞（iMSC）注射到GAN饮食模型小鼠的脾脏中并静脉注射，并使用采用浮动切片法的高灵敏度免疫电子显微镜和FEI制造的透射电子显微镜Tecnai12BT对给药后的肝脏组织进行分析。使用扫描电子显微镜 Qunta3D FEG DualBeam 系统分析所施用的 iMSC 的特征和动态。此外，使用天狼星红染色评估肝组织的肝纤维化，并使用H-E染色和油红染色评估肝脏脂肪沉积。结果发现，对脾脏给药在抑制肝纤维化和肝脏脂肪方面更有效。此外，我们还开发了加重肝脂肪变性模型（AK3KO小鼠）和表达MMP9的细胞标记转基因模型（MMP9/LacZ-DsRed）。我们通过给小鼠施用 GAN 特殊饲料（Tg）创建了 MAFLD 模型，并开始使用电子显微镜将 iMSC 注入脾脏或静脉注射来评估该模型在肝纤维化或脂肪形成环境下肝细胞和星状细胞的变化。建立MAFLD模型，评估抑制纤维化和脂肪形成的效果并进行动力学分析。此外，从iMSC培养液中产生外泌体，并将外泌体持续静脉注射给GAN特殊饮食模型小鼠，以评估其抑制肝纤维化和肝脂肪变性的效果。此外，我们创建了新开发的代谢异常的AK5KO小鼠，给予来自GFPTG的GFP阳性骨髓细胞或GFP阳性骨髓源性间充质细胞（MSC），并分析了给予的细胞在肝脏中的动态和功能。我做到了。