免疫系細胞とヒトiPSニューロン共培養系によるASDの病態解析

使用免疫系统细胞和人 iPS 神经元共培养系统对 ASD 进行病理分析

• 批准号: 22K07586
• 负责人: 鳥塚 通弘
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07586/
• 关键词: 自閉スペクトラム症; マクロファージ; T細胞; iPS細胞; ヒトiPS細胞; 炎症

先行して行っていた、健常者２名由来のiPS細胞株から分化誘導した興奮性ニューロンと、末梢血単核球から誘導したマクロファージの共培養系を用いた解析を確認した。定型発達者および自閉スペクトラム症患者、各群３名づつの解析は終了していたが、自閉スペクトラム症のHeterogeneity性を考慮して、各群5名づつに対象を増やして、計１０名の末梢血単核球由来マクロファージを得て解析を行った。M１マクロファージにおける炎症性サイトカインの高発現と、M１マクロファージがiPS細胞由来興奮性ニューロンの樹状突起を退縮させる効果について、自閉スペクトラム症群で有意に高いことを確認した。また、炎症性サイトカインについては２種類が影響を与えていると思われることを見出した。確認ができた対象者のうち、まず、定型発達者１名、自閉スペクトラム症患者１名の協力を得て、末梢静脈血を得て、マクロファージの誘導に加え、各種T細胞の分離培養法の確立を行っている。CD４陽性T細胞の分離については可能であると考えられる。CD４陽性CD２５陽性のRegulatory T細胞についても分離はできていると考えられる。同対象者から得たマクロファージにこれらT細胞が与える影響については、トランスウェルアッセイを開始している。現在までのところ、マクロファージの発現する炎症性サイトカインに与える影響について、qRT-PCRなどで確認中である。

我们使用由来自两个健康个体的 iPS 细胞系诱导分化的兴奋性神经元和由外周血单核细胞诱导的巨噬细胞的共培养系统证实了之前的分析。分析已针对神经正常人群和自闭症谱系障碍患者完成，每组 3 人，但考虑到自闭症谱系障碍的异质性，受试者人数增加至每组 5 人，共计 10 人。获得并分析血液单核细胞来源的巨噬细胞。我们证实，在自闭症谱系障碍组中，M1巨噬细胞中炎症细胞因子的高表达以及M1巨噬细胞对iPS细胞来源的兴奋性神经元树突退化的影响显着较高。我们还发现两种类型的炎症细胞因子似乎有作用。在确诊的受试者中，我们首先在一名神经正常者和一名自闭症谱系障碍患者的合作下获取了外周静脉血，除了巨噬细胞的诱导外，我们还正在建立各种T细胞的分离和培养方法。人们认为分离 CD4 阳性 T 细胞是可能的。据认为也可以分离CD4阳性CD25阳性调节性T细胞。我们已经开始进行 Transwell 检测，以检查这些 T 细胞对从同一受试者获得的巨噬细胞的影响。迄今为止，对巨噬细胞表达的炎症细胞因子的影响正在使用 qRT-PCR 和其他方法得到证实。

项目成果

ヒト細胞リソースを用いた精神疾患研究

利用人类细胞资源进行精神疾病研究

• 发表时间: 2021
• 作者: 陳冲;中川 伸;鳥塚通弘
• 通讯作者: 鳥塚通弘

Cellular analysis of Autism Spectrum Disorder using co culture system of hiPSC derived neurons and macrophage s from patients

使用来自患者的 hiPSC 来源的神经元和巨噬细胞的共培养系统对自闭症谱系障碍进行细胞分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Ryohei Takada 1 ;Michihiro Toritsuka 1 Takahira Yamauchi 1 ;Yoshinori Kayashima 1 ;Rio Ishida 1 Yuki Nish i 1 Hiroaki Fukui 1 ;Mitsuru Ishikawa 2 ;Hideyuki Okano 2 ;and Manabu Makinodan 1
• 通讯作者: and Manabu Makinodan 1