大黄の修治による血流改善メカニズムの解明および漢方処方への応用

阐明大黄治疗改善血流的机制及其在中草药方剂中的应用

基本信息

批准号：
22K07425
负责人：
太田美里
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、大黄の修治による血流改善作用の向上を検証することを目的として、ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）を使ったin vitroでの血流改善作用の評価系を構築するための以下の実験を行った。（１）再現性のある実験方法の検証：HUVECは細胞増殖速度や薬物に対する反応性に個体差があるのと同時に継代を続けることで再現性がとれないという問題があった。そこで、HUVECの株化細胞のHUEhT-1を使ったが、HUVECに比して増殖が遅く、大黄エキスに対する反応性も低かった。そのため、HUVECの同じ継代数のストックを大量に作成したところ、毎回、同じ条件で実験できるようになった。（２）内皮型一酸化窒素合成酵素（eNOS）発現量の評価系の構築：Western blot法では様々な修治品のサンプルを同時に評価できないため、96 well plateを用いたin cell-ELISA法およびWestern blot法を簡略化したドットブロットによる評価系を構築し、大黄添加で濃度依存的にeNOSの発現量が増加することを確認した。（３）一酸化窒素（NO）産生量の評価系の構築：Griess法によるeNOS由来のNO産生量の検出感度を上げた評価系を構築し、大黄添加により濃度依存的にNO産生量が増加することを確認した。実験系構築に時間を要したため、R4年度は修治品の検証にまでは至らなかったが、以上の実験系を用いた修治大黄の血流改善作用の評価、およびその活性本体の解明により、伝統医学的な瀉下から血流改善への作用変化の科学的エビデンスを得ることが可能となる。更には婦人科の漢方処方に適した血流改善作用が高い大黄の開発を目指す。

在这项研究中，我们进行了以下实验，以构建一种评估系统，以使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）在体外改善血液流动，以验证因rhaemollia固化而改善血液流量改善的改善。（1）可再现的实验方法的验证：HUVEC有一个问题，即细胞生长速率和药物反应性存在个体差异，并且无法通过继续传播来实现可重复性。因此，使用了HUVEC的细胞系HUEHT-1，但其增殖比HUVEC慢，对大黄提取物的反应较低。因此，当我们为HUVEC创建大量相同通道的库存时，我们每次都可以在相同条件下进行实验。（2）构建用于内皮一氧化氮合酶（ENOS）表达水平的评估系统：由于Western印迹方法无法同时评估治疗产品的各种样品，因此使用DOT斑点构建了评估系统，DOT构建，该系统使用96井板和西部孔隙方法来简化了在细胞 - ELISA方法中，并确认了rhubarb的启动水平，并确认了rhubarb的含量，并确认了rhubarb的含量。（3）构建用于评估一氧化氮（NO）生产量的系统：构建了评估系统，该系统通过Griess方法提高了ENOS衍生的NO生产的检测灵敏度，并确认添加大黄增加了浓度依赖性方式的NO NO生成的量。因为花了一些时间来构建实验系统，所以我们无法在2014年验证Shuji产品，但是通过使用上述实验系统，我们可以获得Shujiri Rhaeol的影响的科学证据，以使用传统的医疗污泥改善血液以改善血液流动来改善血液。此外，我们旨在发展大黄，该大黄具有高血流改善作用，适合妇科中期草药处方。